银杏叶茶主要成分含量测定及抗氧化、抗炎活性分析

邓慧聪,柳娟,冯宝民,卢轩,马逍遥 *

(大连大学 生命健康学院,辽宁 大连 116622)

摘 要该文以银杏叶茶为研究对象,建立银杏叶茶中总黄酮、总萜类内酯及总酚酸含量测定方法,并比较其沸水浸泡提取物的体外抗氧化和抗炎活性。采用紫外-可见分光光度法测定银杏叶茶中总黄酮含量,利用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定银杏叶茶中总萜类内酯和总酚酸含量。利用自由基清除试验评估银杏叶茶沸水浸泡提取物的抗氧化活性,通过检测银杏叶茶沸水浸泡提取物对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导细胞释放炎症介质一氧化氮的抑制能力,评估银杏叶茶提取物的抗炎作用。结果显示,银杏叶茶中总黄酮和总萜类内酯含量最高分别可达(37.583±0.003) mg/g 和(52.153±0.061) mg/g,而总酚酸含量为(24.831±0.004) mg/g,该含量测定方法简便易行,结果准确。生物活性分析显示,银杏叶茶沸水提取物具有抗氧化能力和抗炎活性。

关键词银杏叶茶;含量测定;总黄酮;总萜类内酯;总酚酸;抗氧化活性;抗炎活性

银杏(Ginkgo biloba L.)又名白果、公孙树,为银杏科、银杏属孑遗植物,素有“活化石”之称。我国是银杏的发源地,其资源约占世界总量的70%[1-2]。关于银杏叶片、果实等医药价值的记载始于宋代,后明代《本草纲目》、清代《本草逢源》等中医药典籍也均有记述。2020年版《中国药典》中关于银杏叶的记载为“性味甘、苦、涩、平,归心肺经,功效有活血化瘀、通络止痛、敛肺平喘、化浊降脂等,常用于疾病防治如淤血阻络、肺虚咳喘、胸痹心痛和高脂血症等”[3]。银杏叶可用于肺虚咳喘、冠心病、高血脂等疾病的治疗,主要功效成分为黄酮和萜类内酯[4-5]。自上世纪80年代初起,国内银杏叶茶的制作和生产逐渐兴起,银杏叶茶不仅同样含有多种黄酮和萜类内酯成分,而且具有生津止渴、解乏提神、强心健脑等多种作用[6]。药理学研究表明银杏叶茶的水提取物可有效缓解血脂代谢异常,通过对脂质水平异常的动物个体血脂及脂蛋白代谢进行研究,发现长期饮用银杏叶茶可显著改善高胆固醇饮食小鼠的总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白等血脂及脂蛋白代谢异常状况[7-8]。在小鼠血栓形成模型和小鼠急性脑缺血模型研究中,发现银杏叶茶通过增强心脑血管微循环,防止动脉粥样硬化,发挥对心脑血管系统的保健作用[9]。此外,银杏叶茶提取物还可降低酒精诱导的小鼠胃黏膜超氧化物歧化酶的活化[10],并在体外实验中展现出抑制酪氨酸酶活化和多巴自氧化作用,表明其具有显著的抗氧化活性[11]。银杏叶茶随着其改善心脑血管功能、降血脂、抗氧化等多种生物活性的逐步揭示而备受关注,在2010年被认定为保健茶[12]

然而,目前市售银杏叶茶品质参差不齐,其中黄酮和萜类内酯等功效成分含量差异较大,极大影响了银杏叶茶产业的正常发展。2020年版《中国药典》规定银杏叶提取物中总黄酮醇苷含量不低于24%,萜类内酯含量不低于6%,但并未规定银杏叶茶的品质标准。此外,银杏叶中还含有毒性成分酚酸,酚酸的限量是银杏叶制剂质量评价的关键指标之一[13]。2020年版《中国药典》规定银杏叶提取物中总酚酸含量不超过5 μg/g,但未对银杏叶茶中总酚酸进行限量规定[14]。以上现状也是近年来国内一些企业生产的银杏叶产品无法打开国外市场的重要原因,质量检测不能满足外销要求成为了限制银杏叶产品进一步发展与应用的关键问题。

为此,本研究以大连金普新区老太山中华非遗银杏叶茶为研究对象,采用紫外分光光度法测定总黄酮的含量[1,15],利用高效液相色谱法测定总萜类内酯[16]和总酚酸[17-18]的含量。通过检测银杏叶茶提取物清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical,DPPH)自由基的能力,评价银杏叶茶提取物的体外抗氧化活性[19-20];并通过检测银杏叶茶提取物对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导细胞释放一氧化氮的抑制能力,评估银杏叶茶提取物的抗炎作用[21-23],以期为科学控制该非遗产品的品质提供参考,对今后推进银杏叶茶系列产品的商品化、国际化提供科学数据支持,同时也为改善其制作加工工艺提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

银杏叶茶:老太山中华非遗银杏茶科学研究所自制,以不同生长时期的银杏叶片为原料,通过传统手工制茶方式加工而成的冲泡类饮品,属于大连市金普新区非遗产品。

乙腈、甲醇(均为色谱纯,纯度>99%):月旭科技(上海)股份有限公司;DPPH(纯度>99%)、银杏内酯A(纯度≥98%)、银杏内酯B(纯度≥98%)、银杏内酯C(纯度≥98%)、甲酸(纯度≥99%)、无水乙醇(纯度≥99%)、亚硝酸钠(纯度>98%)、硝酸铝(纯度>99%)、氢氧化钠(纯度≥98%)、醋酸钠(纯度>99%):上海麦克林生化科技股份有限公司;芦丁(纯度≥98%)、LPS(纯度≥99%)、二甲基亚砜(纯度≥99%)、青链霉素混合液(100×)(纯度≥99%):北京索莱宝科技有限公司;盐酸(纯度>99%):天津市科密欧化学试剂有限公司;白果内酯(纯度≥98%)、白果酸(纯度≥98%)、白果新酸(纯度≥98%):上海源叶生物科技有限公司;一氧化氮检测试剂盒、地塞米松(dexamethasone,Dex)(纯度≥99%):上海碧云天生物技术有限公司;小鼠单核巨噬细胞RAW264.7 细胞株:武汉普诺赛生命科技有限公司;高糖培养基(Dulbecco's modified eagle medium,DMEM)、胎牛血清:广州赛国生物科技有限公司。除特殊标注外,其余试剂均为分析纯。

1.2 仪器与设备

AL104 型电子天平:瑞士Mettler Toledo 公司;HHZK2 型恒温水浴锅:郑州华特仪器设备有限公司;I-300 Pro 型旋转蒸发仪:瑞士BUCHI 公司;UV2102C 型紫外可见分光光度计:美国Unico 公司;1260 Infinity II型半制备高效液相色谱仪:美国Agilent 公司;QTOF 4600 型液相色谱质谱联用仪:美国SCIEX 公司;imark酶标仪:美国BIORAD 公司;ESCO 二氧化碳培养箱:新加坡艺思高科技有限公司;KQ2200 型超声波清洗机:昆山市超声仪器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 总黄酮含量测定方法的建立

1.3.1.1 对照品溶液制备

准确称取10 mg 于105 ℃干燥至恒重的芦丁对照品,放置于50 mL 容量瓶,加入少量70% 乙醇并充分溶解,定容至刻度,摇匀备用,即得质量浓度为0.212 mg/mL 的芦丁对照品溶液。

1.3.1.2 供试品溶液制备

准备银杏叶茶若干,干燥并稍加研磨后精密称取各4 g 共5 份,依次进行蒸馏水回流提取、95%乙醇回流提取、75%乙醇回流提取、50%乙醇回流提取、沸水浸泡提取,料液比均为1∶25 (g/mL),提取30 min,其中沸水浸泡提取以泡茶的方式进行3 次,每次30 min。每次泡茶完成后需将温度降至40 ℃,再重复进行下一次浸泡,分别得到沸水一泡、沸水二泡和沸水三泡银杏叶茶提取液。将以上7 种提取液分别过滤,取上清液,减压旋干,得到银杏叶茶提取物浸膏。

1.3.1.3 标准曲线的绘制

精密吸取芦丁对照品溶液0.0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL,分别加入到10 mL 的容量瓶中,加70%乙醇至3.5 mL,分别加入0.5 mL 的5% 亚硝酸钠溶液,摇匀,静置6 min 后,分别加0.5 mL 的10% 硝酸铝溶液,摇匀,静置6 min 后,再分别加1% 氢氧化钠溶液5 mL,摇匀,使用70% 乙醇定容至刻度,摇匀,静置12 min 后,参照紫外可见分光光度法,以空白溶液为参比,于波长510 nm 处测定吸光度,以吸光度Y 为纵坐标,对照品浓度X(mg/mL)为横坐标,绘制标准曲线。

1.3.1.4 总黄酮含量测定

按1.3.1.2 中的方法制备提取物样品溶液,取0.2 mL,按1.3.1.3 中的方法进行显色,在波长510 nm处测定吸光度,并由标准曲线所得回归方程计算出不同提取方式下银杏叶茶中总黄酮含量。总黄酮含量计算公式如下。

式中:G1 为总黄酮含量,mg/g;C1 为供试品溶液中总黄酮质量浓度,mg/mL;C2 为供试品溶液的质量浓度,mg/mL;W1 为提取物的质量,mg;W2 为银杏叶茶的质量,g。

1.3.2 总萜类内酯含量测定方法的建立

1.3.2.1 色谱条件

色谱柱:welch Ultimate XB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:色谱甲醇∶0.1%甲酸水溶液(32∶68,体积比);流速:1 mL/min;进样体积:10 μL;检测器:190、210 nm 双波长紫外检测器。

1.3.2.2 对照品溶液制备

精密称定银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C 和白果内酯对照品适量,加色谱甲醇溶解制成10 mg/mL的对照品母液,过0.22 μm 滤膜并转移至液相瓶中,即得10 mg/mL 的银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯对照品溶液。

1.3.2.3 供试品溶液制备

取适量1.3.1.2 中制备的7 种银杏叶茶提取物,放置于具塞锥形瓶中,分别加入色谱甲醇50 mL,密塞并称定质量,超声处理20 min,静置放冷后,称质量,使用色谱甲醇补足减少的质量,摇匀,过滤,精密量取滤液20 mL,回收的色谱甲醇滤液减压旋干,残渣加10 mL水,置于恒温水浴锅中温热使溶散,加入2 滴2%盐酸溶液,使用5%醋酸钠溶液20 mL 洗涤,静置分层后分取下层醋酸钠水相,先用乙酸乙酯10 mL 洗涤,然后用水洗涤2 次,每次20 mL,合并水液,使用乙酸乙酯10 mL 洗涤,合并乙酸乙酯液,减压回收至干,残渣用适量色谱甲醇溶解,过0.22 μm 滤膜并转移至液相瓶中,即得7 种银杏叶茶提取物甲醇溶液。

1.3.2.4 标准曲线的绘制

精密吸取标准品溶液母液10 mg/mL,梯度稀释得到5.0、2.5、1.25、0.625 mg/mL 系列浓度的标准品溶液,分别精密吸取10 μL 系列浓度对照品溶液,使用高效液相色谱仪测定,以峰面积积分值y 为纵坐标,对照品浓度x(mg/mL)为横坐标,绘制标准曲线。

1.3.2.5 总萜类内酯含量测定

按1.3.2.3 中的方法制备提取物样品溶液,分别取10 μL,使用高效液相色谱仪检测分析,由回归方程计算出不同提取方式下银杏叶茶中总萜类内酯含量,计算公式如下。

式中:G2 为总萜类内酯含量,mg/g;C3 为供试品溶液的总萜类内酯质量浓度,mg/mL;C2 为供试品溶液的质量浓度,mg/mL;W3 为乙酸乙酯萃取物的质量,mg;W2 为银杏叶茶的质量,g。

1.3.3 总酚酸含量测定方法的建立

1.3.3.1 色谱条件

色谱柱:welch Ultimate XB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:乙腈∶0.1% 甲酸水溶液(85∶15,体积比);流速:1 mL/min;进样体积:10 μL;检测器:210、254 nm 双波长紫外检测器。

1.3.3.2 对照品溶液制备

精密称定适量白果酸、白果新酸对照品,加色谱甲醇溶解制成10 mg/mL 的对照品母液,过0.22 μm 滤膜并转移至液相瓶中,即得10 mg/mL 的白果酸、白果新酸对照品溶液。

1.3.3.3 供试品溶液制备

取适量1.3.1.2 中制备的7 种提取物,分别加入适量色谱甲醇溶解,过0.22 μm 滤膜并转移至液相瓶中,即得7 种银杏叶茶提取物甲醇溶液。

1.3.3.4 标准曲线的绘制

精密吸取标准品溶液母液10 mg/mL,梯度稀释得到5、2.5、1.25、0.625、0.312 5 mg/mL 系列浓度的标准品溶液,分别精密吸取10 μL 系列浓度对照品溶液,使用高效液相色谱仪测定,以峰面积积分值y 为纵坐标,对照品浓度x(mg/mL)为横坐标,绘制标准曲线。

1.3.3.5 总酚酸含量测定

按1.3.3.3 中的方法制备提取物样品溶液,分别取10 μL,使用高效液相色谱仪检测分析,由回归方程计算出不同提取方式下银杏叶茶中总酚酸含量,计算公式如下。

式中:G3 为总酚酸含量,mg/g;C4 为供试品溶液的总酚酸质量浓度,mg/mL;C2 为供试品溶液的质量浓度,mg/mL;W1 为提取物的质量,mg;W2 为银杏叶茶的质量,g。

1.3.4 抗氧化活性测定

使用DPPH 法评价样品的抗氧化能力。取1.3.1.2制得的沸水一泡、沸水二泡和沸水三泡银杏叶茶提取物样品浸膏,质量分别为0.810 9、0.265 8 g 和0.076 9 g,加入蒸馏水还原成40 g/L 生药量后浓度分别为8.1、2.7 mg/mL 和0.77 mg/mL 的溶液备用。取0.3 mL 不同浓度的银杏叶茶粗提物溶液,并使用等体积蒸馏水作为空白对照组,加入2.7 mL 浓度为0.2 mmol/L 的DPPH 溶液,充分振摇,避光静置30 min,在517 nm 处测定吸光度,记为AS,空白对照组吸光度记为A0。每个浓度样品设置3 组重复。DPPH自由基清除率(A,%)计算公式如下。

1.3.5 抗炎活性测定

1.3.5.1 细胞培养

使用10% 胎牛血清、1% 青链霉素混合液的DMEM 培养RAW264.7 细胞,培养条件为37 ℃、5%CO2 和95%湿度。细胞生长至70%~80%融合度后进行传代,取对数生长期细胞用于试验。通过对LPS 诱导细胞释放炎症介质一氧化氮的抑制能力评价样品的抗炎活性。取适量1.3.1.2 制得的沸水一泡、沸水二泡和沸水三泡银杏叶茶提取物样品浸膏备用。

1.3.5.2 一氧化氮表达量检测

将浓度为1.5×105 个/mL 的RAW264.7 细胞接种在96 孔板中,每孔100 μL,置于二氧化碳培养箱中培养过夜。试验设置空白(Con)组、LPS 模型(Mod)组(2 ng/mL LPS)、Dex 阳性药物(2 ng/mL LPS+10 μmol/L Dex)组、沸水一泡组(2 ng/mL LPS+8.1 mg/mL 沸水一泡提取物)、沸水二泡组(2 ng/mL LPS+2.7 mg/mL 沸水二泡提取物)、沸水三泡组(2 ng/mL LPS+0.77 mg/mL沸水三泡提取物)。依据分组提前加入对应药物2 h后加入终浓度为2 ng/mL 的LPS,Con 组加入等体积的DMEM,继续培养细胞24 h 后,使用一氧化氮检测试剂盒检测上清液中一氧化氮表达量。

1.4 数据处理

以上所有试验至少3 组平行重复,所得数据使用软件graphpad 进行分析,结果表示为平均值±标准差。

2 结果与分析

2.1 总黄酮含量的测定2.1.1 标准曲线的绘制

计算得回归方程为Y=10.361X+0.008 4,R2=0.999 5。结果表明,芦丁对照品质量浓度在0.021 2~0.074 2 mg/mL 内与吸光度具有良好的线性关系。

2.1.2 重复性试验

精密称取同一批次的银杏叶茶6 份,按1.3.1.2 中的沸水浸泡提取方法,分别提取30 min,制备供试品溶液。随后分别按1.3.1.3 中的方法进行显色,测定对应吸光度,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为1.02%(n=6),表明总黄酮含量测定方法重复性良好。

2.1.3 总黄酮含量测定

不同提取方式下银杏叶茶总黄酮含量测定结果如表1 所示。

表1 不同提取方式下银杏叶茶总黄酮含量(n=3)
Table 1 Total flavonoid content in Ginkgo leaf tea by different extraction methods (n=3)

样品处理方式水提95%醇提75%醇提50%醇提沸水一泡沸水二泡沸水三泡总黄酮含量/(mg/g)29.814±0.003 28.414±0.002 37.583±0.003 35.267±0.001 15.920±0.005 4.844±0.001 1.646±0.002

由表1 可知,本试验采用的提取方式可分为热回流提取和沸水浸泡,其中热回流提取效果整体优于沸水浸泡效果。在热回流提取方式中,不同浓度乙醇对总黄酮的提取效果具有一定影响,75%乙醇提取效果最佳,95%乙醇提取效果最差,测定的总黄酮含量分别为(37.583±0.003)mg/g 和(28.414±0.002)mg/g。此外,随沸水浸泡次数的增加,总黄酮的提取效率逐渐降低,其中第一次、第二次和第三次沸水浸泡提取物的总黄酮含量分别为(15.920±0.005)、(4.844±0.001)、(1.646±0.002)mg/g。综上,该银杏叶茶中总黄酮含量较高,使用沸水浸泡3 次可以有效提取银杏叶茶中的总黄酮。

2.2 总萜类内酯含量的测定

2.2.1 标准曲线的绘制

银杏叶茶萜类内酯标准曲线如表2 所示。

表2 银杏叶茶萜类内酯标准曲线
Table 2 Standard curves of terpene lactones in Ginkgo leaf tea

成分银杏内酯A银杏内酯B银杏内酯C白果内酯标准曲线y=309.63x+92.586,R2=0.996 3 y=286.15x+80.725,R2=0.999 8 y=354.02x+196.78,R2=0.998 6 y=284.07x+60.883,R2=0.999 6线性范围/(mg/mL)0.091~9.998 0.623~9.999 0.621~14.469 0.351~28.089

2.2.2 总萜类内酯含量测定

总萜类内酯对照品溶液和供试品溶液的液相色谱图如图1 所示。

图1 总萜类内酯对照品溶液和供试品溶液的液相色谱图
Fig.1 HPLC chromatograms of the reference substance solutions of terpene lactones and sample solutions

不同提取方式下银杏叶茶总萜类内酯含量测定结果如表3 所示。

表3 不同提取方式下银杏叶茶总萜类内酯含量(n=3)
Table 3 Total terpene lactone content in Ginkgo leaf tea by different extraction methods (n=3) mg/g

提取方式水提95%醇提75%醇提50%醇提沸水一泡沸水二泡沸水三泡银杏内酯A含量1.020±0.013 1.698±0.010 2.297±0.011 3.095±0.010 0.885±0.009 0.053±0.002 0.003±0.000银杏内酯B含量8.574±0.021 12.177±0.019 12.361±0.020 9.909±0.019 3.468±0.017 0.210±0.001 0.019±0.001银杏内酯C含量14.468±0.016 3.771±0.014 4.915±0.012 6.973±0.015 2.241±0.012 0.134±0.001 0.005±0.000白果内酯含量28.091±0.011 21.861±0.009 18.459±0.007 12.484±0.005 4.028±0.003 0.156±0.002 0.011±0.002总萜内酯含量52.153±0.061 39.507±0.052 38.032±0.050 32.461±0.049 10.622±0.041 0.553±0.006 0.038±0.003

由图1 和表3 可知,在各组中,水提组的萜类内酯含量最高。在3 次沸水浸泡样品中的总萜类内酯含量整体低于热回流提取样品的总萜类内酯含量,且随沸水浸泡次数的增加,总萜类内酯的提取效率呈现逐渐降低的趋势,第一次、第二次和第三次沸水浸泡中总萜类内酯的含量分别为(10.622±0.041)、(0.553±0.006)、(0.038±0.003) mg/g。因此,在选用该银杏叶茶作为饮品时,沸水浸泡一次即可最大化地有效获取萜类内酯。

2.3 总酚酸含量的测定

2.3.1 标准曲线的绘制

银杏叶茶酚酸标准曲线如表4 所示。

表4 银杏叶茶酚酸标准曲线
Table 4 Standard curve of phenolic acid in Ginkgo leaf tea

成分白果酸白果新酸标准曲线y=4 658.2x+1 148.6,R2=0.999 1 y=5 584.6x-92.201,R2=0.999 5线性范围/(mg/mL)0.036~9.997 0.053~4.998

2.3.2 总酚酸含量测定

在1.3.2.1 条件下,白果新酸和白果酸对照品保留时间接近,样品其他成分对测定无干扰,对照品和供试品溶液在254 nm 吸收波长下的液相色谱图如图2所示。

图2 酚酸对照品溶液和供试品溶液的液相色谱图
Fig.2 HPLC chromatograms of the reference substance solutions of phenolic acids and sample solutions

不同提取方式下银杏叶茶总酚酸含量测定结果如表5 所示。

表5 不同提取方式下银杏叶茶总酚酸含量(n=3)
Table 5 Total phenolic acid content in Ginkgo leaf tea by different extraction methods (n=3) mg/g

注:/表示未检出。

提取方式水提95%醇提75%醇提50%醇提沸水一泡沸水二泡沸水三泡白果新酸含量/3.741±0.001 1.648±0.002 1.143±0.001白果酸含量/21.09±0.003 4.841±0.001 0.789±0.002总酚酸含量/24.831±0.004 6.489±0.003 1.932±0.003/////////

由图2 和表5 可知,不同的乙醇浓度对总酚酸的提取效果影响较大,其含量随乙醇浓度增加而升高。此外,3 次沸水浸泡样品中总酚酸含量均未检出,提示该银杏叶茶利用沸水浸泡后饮用是安全的。综合上述结果,虽然该银杏叶茶中总酚酸含量超过20 mg/g,但通过沸水浸泡的方式不会提取出酚酸类成分,因此如何保持制作工艺对总酚酸含量的控制与饮用的安全性将成为该产品市场化的关键。

2.4 抗氧化活性的评价

银杏叶茶沸水浸泡提取物DPPH 自由基清除率如图3 所示。

图3 银杏叶茶沸水浸泡提取物DPPH 自由基清除率
Fig.3 DPPH free radical scavenging rate of the boiling water extract of Ginkgo leaf tea

由图3 可知,40 g/L 银杏叶茶沸水一泡提取物对DPPH 自由基清除率可达92.5%,沸水二泡提取物对DPPH 自由基清除率达87.4%,而沸水三泡提取物对DPPH 自由基清除率为70.2%,说明使用沸水浸泡3 次的银杏叶茶提取物均表现出抗氧化活性,其中沸水一泡提取物的抗氧化活性最为明显。

银杏叶中的黄酮类成分是其发挥抗氧化活性的关键[4-5,19],在黄酮定量分析中发现,沸水一泡相对于沸水二泡和沸水三泡中含有更多的总黄酮成分,这与沸水一泡较强的抗氧化活性相对应。说明可根据银杏叶茶的总黄酮含量和沸水浸泡的黄酮提取效果分析其抗氧化活性,为加工工艺的优化提供依据。

2.5 抗炎活性的评价

炎症是机体对生物因子、物理因子、坏死组织等有害刺激的防御机制,其在癌症、糖尿病、冠心病、抑郁症、阿尔茨海默病等慢性病的发生、发展中起着至关重要的作用[24]。按1.3.4.2 方法测定银杏叶茶沸水三次浸泡提取物对LPS 诱导细胞释放炎症介质一氧化氮的抑制能力,结果如图4 所示。

图4 银杏叶茶沸水浸泡提取物对脂多糖诱导的RAW264.7 细胞释放炎症介质一氧化氮的抑制能力
Fig.4 Inhibitory effect of the boiling water extract of Ginkgo leaf tea on LPS-induced release of inflammatory mediator NO in RAW264.7 cells

与Con 组相比,###表示差异高度显著,P<0.001;与Mod 组相比,***表示差异高度显著(P<0.001),**表示差异极显著(P<0.01),*表示差异显著(P<0.05)。

由图4 可知,与Mod 组相比,Dex 组和沸水一泡组对一氧化氮表达量的抑制效果高度显著(P<0.001),沸水二泡组和沸水三泡组也可有效抑制一氧化氮的表达,说明使用沸水浸泡的银杏叶茶具有较强的抗炎活性,可进一步开拓银杏叶茶的应用。

银杏叶中的萜类内酯成分是其发挥抗炎活性的关键[4,17],在萜类内酯定量分析中发现,沸水一泡相对于沸水二泡和沸水三泡中含有更多的总萜类内酯成分,这与沸水一泡组较强的抗炎活性相对应。说明可根据银杏叶茶的总萜类内酯含量和沸水浸泡的萜类内酯提取效果分析其抗炎活性。

3 讨论与结论

本试验对银杏叶茶中主要成分进行定量分析,75%乙醇热回流提取条件下测得总黄酮含量最高,达(37.438±0.003) mg/g,蒸馏水热回流提取条件下测得总萜类内酯和95% 乙醇热回流提取条件下测得总酚酸二者最高含量分别达(52.153±0.061) mg/g 和(24.831±0.004) mg/g,所建立的方法操作简便,重复性好。

银杏叶茶富含多种对人体有益的化学成分,其中以黄酮类、萜类内酯、多糖类和氨基酸为主[6]。银杏叶茶沸水3 次浸泡提取物均表现出较好抗氧化和抗炎活性,结合总黄酮和总萜类内酯成分分析结果,发现两种成分分别与银杏叶茶的抗氧化和抗炎活性之间存在一定的量效关系。

与已知银杏叶茶文献相比较,大连市太山堂银杏叶茶沸水浸泡提取物中的萜类内酯含量高于市场同类银杏叶茶成分分析的结果,而黄酮含量基本持平[16-17],同时沸水浸泡提取物中酚酸含量几乎为零。本试验提取方法简便,更符合人们日常饮茶习惯。目前市场上关于具体银杏叶茶品牌的相关化学成分分析和药理试验研究相对较少,本文基于大连市金普新区非物质文化遗产太山堂银杏叶茶,建立基础理化分析方法,以期为科学控制该类产品的质量提供参考,并提示可以深入研究该系列更多银杏叶茶产品在抗氧化和抗炎领域的应用。

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Determination of the Main Component Content in Ginkgo Leaf Tea and Investigation of Its Antioxidant and Anti-inflammatory Activities

DENG Huicong,LIU Juan,FENG Baomin,LU Xuan,MA Xiaoyao *

(College of Life and Health,Dalian University,Dalian 116622,Liaoning,China)

Abstract: This study focused on Ginkgo leaf tea as the research subject,establishing methods to determine the content of total flavonoids,total terpenoid lactones,and total phenolic acids in the tea. Moreover,this study also compared the in vitro antioxidant and anti-inflammatory activities of its boiling water extracts. The total flavonoid content in Ginkgo leaf tea was measured using ultraviolet-visible spectrophotometry,while the total terpenoid lactones and total phenolic acids were determined by high-performance liquid chromatography (HPLC).The antioxidant activity of the boiling water extract of Ginkgo leaf tea was evaluated by the free radical scavenging method. Additionally,the anti-inflammatory effect of the extract was assessed by analyzing its inhibitory ability on the release of nitric oxide,an inflammatory mediator,from lipopolysaccharide(LPS) induced cells.The results indicated that the contents of total flavonoids and total terpene lactones in the Ginkgo leaf tea were the highest,reaching (37.583±0.003) mg/g and (52.153±0.061) mg/g,respectively,whereas the content of total phenolic acid was(24.831±0.004) mg/g. This method for content determination was simple and feasible,yielding accurate results. Biological activity analysis revealed that the boiling water extract of Ginkgo leaf tea exerted antioxidant capacity and anti-inflammatory activity.

Key words: Ginkgo leaf tea;content determination;total flavonoids;total terpenoid lactones;total phenolic acids;antioxidant activity;anti-inflammatory activity

DOI: 10.12161/j.issn.1005-6521.2026.06.009

基金项目: 辽宁省教育厅面上项目(LJKZ1179);辽宁省教育厅服务地方项目(LJKFZ20220287);辽宁省教育厅基本科研项目(JYTQN2023100)

作者简介: 邓慧聪(1997—),女(汉),硕士研究生,研究方向:天然产物化学成分分析。

*通信作者: 马逍遥(1990—),男(汉),讲师,博士,研究方向:中药药效物质基础分析。

引文格式:

邓慧聪,柳娟,冯宝民,等. 银杏叶茶主要成分含量测定及抗氧化、抗炎活性分析[J]. 食品研究与开发,2026,47(6):63-70.

DENG Huicong,LIU Juan,FENG Baomin,et al. Determination of the Main Component Content in Ginkgo Leaf Tea and Investigation of Its Antioxidant and Anti-inflammatory Activities[J]. Food Research and Development,2026,47(6):63-70.

责任编辑:张璐

收稿日期:2024-11-22