玫瑰为药食同源植物，玫瑰花的活性成分丰富，包含维生素C、天然酚类化合物、多种氨基酸、矿物质和微量元素，以及膳食纤维和胡萝卜素类化合物等[1-2]。玫瑰纯露也被称为“水精油”，是提取玫瑰精油后剩下残留物，一般作为副产品被忽略。研究表明，玫瑰纯露具有多种作用和功效，包括补水保湿、抗衰老、舒缓皮肤等作用[3-4]。朱丽云等[5]对玫瑰纯露的营养以及香气成分进行研究，结果表明玫瑰纯露中含有微量多酚、总糖和氨基酸（2种人体半必需氨基酸，7种人体必需氨基酸）等营养成分，这些成分与其抗氧化活性有着密切关系，并且利用气相色谱-质谱（gas chromatographymass spectrometry，GC-MS）技术分析出了25种香气成分。王斌等[6]对玫瑰纯露的提取工艺进行了研究，同时也对其抗氧化活性和抑菌性进行分析，得出玫瑰纯露具有较强抑菌性和抗氧化活性。蔡跃月等[7]研究结果表明，滇红玫瑰的抗炎活性和抗氧化活性与发酵过程中产生的酚类物质有着密切的关系。Demirbolat等[8]发现口服玫瑰纯露可以改善血液、肾和肝功能，对糖尿病患者具有很好的保护作用，可以增强谷胱甘肽过氧化物酶活性、降低醛糖还原酶活性，从而预防白内障的发生。武艺等[9]的研究结果表明，在不同的盐渍条件下，玫瑰纯露在化合物的种类、数量以及相对含量方面都存在着一定的差异。本研究以丰花一号玫瑰、苦水玫瑰、紫枝玫瑰、墨红玫瑰、滇红玫瑰5种可食用玫瑰为研究对象，测定其玫瑰纯露的抗氧化活性，以期为玫瑰纯露的开发利用提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料与试剂
丰花一号玫瑰、苦水玫瑰、紫枝玫瑰、墨红玫瑰、滇红玫瑰：2024年5月采自吕梁学院园林花木实验室。
1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）、2，2′-联氮双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）[2，2′-azino-bis（3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid），ABTS]、2，4，6-三吡啶基三嗪（2，4，6-tripyridin-2-yl-1，3，5-triazine，TPTZ）、芦丁、没食子酸：美国Sigma公司；氯化铁、碳酸钠、亚硝酸钠、硝酸铝、福林酚、氢氧化钠、双氧水：天津市益晨化学试剂厂。所有试剂均为分析纯。
1.2 试验设备
UV-5200PC紫外可见分光光度计：上海元析仪器有限公司；JJ323BC电子天平：常熟市双杰测试仪器厂；KDM可调控温电热套：山东鄄城华鲁电热仪器有限公司；0015蒸馏装置玻璃仪器：泰州市新奇教学仪器有限公司；UPTA-20超纯水机：上海力辰邦西仪器科技有限公司。
1.3 试验方法
1.3.1 玫瑰纯露的提取
水蒸气蒸馏法提取玫瑰纯露工艺流程[10]：采摘新鲜玫瑰花→清洗并去除花萼→称取所需质量→装入蒸馏瓶→蒸馏→冷凝→油水分离→纯露。
具体操作：用电子天平准确称取新鲜的玫瑰花瓣50 g，将花瓣置于1 000 mL圆底烧瓶中，然后加入蒸馏水100 mL，混合后将圆底烧瓶置于可调控温电热套，安装蒸馏装置并进行加热。收集冷凝后的馏出液，弃去表层黄色油状液体（精油），收集下层水溶液（纯露）密封保存，待测。
1.3.2 总酚含量的测定
以没食子酸溶液浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线，并得出回归线方程[11]。取0.2 mL的样品溶液（玫瑰纯露）加入福林酚试剂0.5 mL，黑暗中反应5 min，再加入1.5 mL 20%碳酸钠溶液，用超纯水将其定容至10 mL，37 ℃水浴避光反应30 min后，用紫外可见分光光度计测定其在765 nm波长下的吸光值，根据没食子酸标准曲线的线性方程来计算样品溶液（玫瑰纯露）中总酚含量。
1.3.3 总黄酮含量的测定
以芦丁溶液浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制芦丁溶液标准曲线[12]。取1 mL的样品溶液（玫瑰纯露），向样品中加入0.5 mL、质量分数为5% 的亚硝酸钠溶液，充分混合均匀，在室温下反应5 min，再加入0.5 mL的溶液质量分数为10%的硝酸铝溶液，继续反应5 min，最后再加入2 mL 1 mol/L的氢氧化钠溶液，用超纯水定容至10 mL，充分混匀，室温下静置15 min后，用紫外可见分光光度计测定其在510 nm波长下的吸光值，根据芦丁标准曲线的线性方程来计算样品溶液（玫瑰纯露）中总黄酮含量。
1.3.4 DPPH自由基清除率的测定
用75%乙醇溶液配制0.2 mmol/L的DPPH溶液，取2 mL 0.2 mmol/L的DPPH溶液，再加入2 mL的样品溶液（玫瑰纯露），让其充分混合均匀，避光静置20 min在 517 nm波长处测吸光值，记作A1；取2 mL 75%乙醇溶液，然后再加入2 mL的样品溶液（玫瑰纯露），相同条件下反应后，测定其吸光值，记作A2；取2 mL、0.2 mmol/L的DPPH溶液，加入2 mL的75% 乙醇溶液，相同条件下反应后，测定其吸光值，记作A0[13]。3次重复试验取平均值。DPPH自由基清除率（D，%）计算公式如下。
1.3.5 ABTS+自由基清除率的测定
取3 mL ABTS工作液，再加入1 mL的样品溶液（玫瑰纯露），让其充分混合均匀，室温静置10 min，用紫外可见分光光度计分别测定反应液在734 nm波长下的吸光值，记作A1；取3 mL超纯水，然后再加入1 mL的样品溶液（玫瑰纯露），相同条件下反应后，测定其吸光值，记作A2；取2 mL的超纯水，加入3 mL的ABTS工作液，相同条件下反应后，测定其吸光值，记作A0[13]。3次重复试验取平均值。ABTS+自由基清除率（A，%）计算公式如下。
1.3.6 羟自由基清除力的测定
取样品溶液（玫瑰纯露）1 mL、0.006 mol/L的硫酸亚铁溶液1 mL、0.006 mol/L的水杨酸溶液1 mL，最后再加入0.006 mol/L的过氧化氢溶液1 mL，37 ℃水浴30 min，让其充分反应，用紫外可见分光光度计分别测定反应液在510 nm波长下的吸光值，记作A1；1 mL超纯水代替过氧化氢重复上述过程，记作A2；取1 mL超纯水代替样品重复上述过程，记作A0[14]。3次重复试验取平均值。羟自由基清除率计算公式如下（O，%）。
1.3.7 总抗氧化能力（ferric ion reducing antioxidant power，FRAP）值的测定
配制0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mmol/L不同浓度的硫酸亚铁溶液，分别吸取0.1 mL加入2.9 mL FRAP工作液，40 ℃水浴20 min，让其充分反应，用紫外可见分光光度计分别测定其在593 nm波长下的吸光值[15]，横坐标表示硫酸亚铁溶液的浓度，纵坐标表示该溶液的吸光值，绘制出硫酸亚铁的标准曲线。然后吸取0.1 mL样品溶液（玫瑰纯露）重复上述反应测定其吸光值。根据硫酸亚铁标准曲线的线性方程，计算样品吸光值对应的Fe2+ 值，并以等效的亚铁浓度（mol/L）表示样品的抗氧化活性。
1.4 数据处理
试验数据为3组重复试验取其平均值，采用Excel、SPSS 27.0软件对数据进行分析并处理并绘制图表。
2 结果与分析
2.1 总酚含量测定结果
2.1.1 没食子酸标准曲线
没食子酸的标准曲线见图1，线性回归方程为y=1.589 7x+0.030 6，相关系数R2=0.994 7。
图1 没食子酸标准曲线
Fig.1 Standard curve of gallic acid
2.1.2 不同玫瑰纯露总酚含量
植物中的酚类物质具有清除自由基、抗氧化、抗衰老的作用[16]，玫瑰纯露中总酚含量越高，其抗氧化活性相对越强，根据没食子酸标准线性回归方程计算5种玫瑰纯露总酚含量，结果如图2所示。
图2 不同玫瑰纯露总酚的含量
Fig.2 Total phenol content of different rose hydrosols
不同大写字母表示品种间存在极显著差异（P＜0.01）。
由图2可知，丰花一号、紫枝、苦水、墨红、滇红、玫瑰 纯 露 中 总 酚 含 量 分 别 为5.18、5.67、4.41、4.27、4.13 mg/g，紫枝玫瑰纯露总酚含量最高，丰花一号玫瑰纯露次之，苦水、墨红和滇红玫瑰纯露含量相差不大，滇红玫瑰纯露总酚含量最低。紫枝玫瑰纯露和丰花一号玫瑰纯露总酚含量极显著高于其他3种玫瑰纯露含量（P＜0.01），且丰花一号玫瑰纯露和紫枝玫瑰纯露总酚含量差异极显著（P＜0.01）。
2.2 总黄酮含量测定结果
2.2.1 芦丁标准曲线
芦丁标准曲线见图3，线性回归方程为y=0.956x+0.002 8，相关系数R2=0.996 9。
图3 芦丁标准曲线
Fig.3 Standard curve of rutin
2.2.2 不同玫瑰纯露总黄酮含量
总黄酮是一种天然的植物化合物，具有多种生物活性，与植物的抗氧化、抗衰老、抗炎等生理功能密切相关[17]。研究表明总黄酮含量越高，抗氧化活性越强。根据芦丁标准线性回归方程计算5种玫瑰纯露总黄酮含量，结果如图4所示。
图4 不同玫瑰纯露总黄酮含量
Fig.4 Total flavonoid content of different rose hydrosols
不同大写字母表示品种间存在极显著差异（P＜0.01）。
由图4可知，不同玫瑰纯露总黄酮含量由大到小依次为丰花一号玫瑰纯露＞紫枝玫瑰纯露＞墨红玫瑰纯露＞苦水玫瑰纯露＞滇红玫瑰纯露，总黄酮含量分别为0.532、0.518、0.378、0.350、0.308 mg/g。丰花一号玫瑰纯露的总黄酮含量最高，紫枝玫瑰纯露次之，滇红玫瑰纯露相对来说较低。丰花一号玫瑰纯露与紫枝玫瑰纯露中总黄酮含量极显著高于苦水、墨红、滇红玫瑰纯露。
2.3 不同玫瑰纯露对DPPH 自由基清除能力的比较
DPPH自由基清除能力是一种简便、常用的评估物质的抗氧化能力的方法，常用于比较不同物质的抗氧化活性[18]。5种玫瑰纯露对DPPH自由基清除能力如图5所示。由图5可知，不同玫瑰纯露对DPPH自由基的清除率从大到小依次为丰花一号玫瑰纯露（72.42%）＞紫枝玫瑰纯露（68.31%）＞苦水玫瑰纯露（55.19%）＞墨红玫瑰纯露（53.47%）＞滇红玫瑰纯露（49.75%）。丰花一号玫瑰纯露对DPPH自由基的清除率最高，紫枝玫瑰纯露次之，其余3种玫瑰纯露对DPPH自由基的清除率较低。丰花一号玫瑰纯露与紫枝玫瑰纯露DPPH自由基的清除率极显著高于其他3种玫瑰纯露。
图5 不同玫瑰纯露对DPPH自由基的清除能力
Fig.5 Scavenging ability of different rose hydrosols on DPPH free radicals
不同大写字母表示品种间存在极显著差异（P＜0.01）。
2.4 不同玫瑰纯露对ABTS+自由基清除能力的比较
ABTS与过硫酸钾反应时，会产生绿色的ABTS+自由基[19]。不同玫瑰纯露对ABTS+自由基的清除能力见图6。
图6 不同玫瑰纯露对ABTS+自由基的清除能力
Fig.6 Scavenging ability of different rose hydrosols on ABTS+free radicals
不同大写字母表示品种间存在极显著差异（P＜0.01）。
由图6可知，丰花一号玫瑰纯露对ABTS+自由基的清除率最高，为83.85%，紫枝玫瑰纯露次之，清除率为78.51%，苦水玫瑰纯露和墨红玫瑰纯露对ABTS+自由基的清除率相差较小，分别为69.97%和72.57%，滇红玫瑰纯露对ABTS+自由基的清除率最低，为64.13%。可以得出丰花一号玫瑰纯露对ABTS+自由基清除率较紫枝玫瑰纯露略强，滇红玫瑰纯露对ABTS+自由基清除率最弱。丰花一号玫瑰纯露与其他4种玫瑰纯露ABTS+自由基清除率差异均极显著，苦水玫瑰纯露与墨红玫瑰纯露差异不显著。
2.5 不同玫瑰纯露对羟自由基清除能力的比较
羟自由基是一种对生物体毒性非常强的活性氧[20]，具有较强的氧化能力。羟自由基清除率常作为衡量物质抗氧化能力的指标。不同玫瑰纯露对羟自由基的清除能力见图7。
图7 不同玫瑰纯露对羟自由基的清除能力
Fig.7 Scavenging ability of different rose hydrosols on hydroxyl free radicals
不同大写字母表示品种间存在极显著差异（P＜0.01）。
由图7可知，5种玫瑰纯露对羟自由基清除能力大小依次为紫枝玫瑰纯露＞丰花一号玫瑰纯露＞苦水玫瑰纯露＞墨红玫瑰纯露＞滇红玫瑰纯露，其对羟自由基的清除率分别为68.65%、65.73%、60.12%、57.46%、53.35%。说明紫枝玫瑰纯露的对羟自由基清除能力最强，丰花一号玫瑰纯露次之，滇红玫瑰纯露最弱。紫枝玫瑰纯露与丰花一号玫瑰纯露的羟自由基清除率极显著高于苦水、墨红、滇红玫瑰纯露，而苦水玫瑰纯露与墨红玫瑰纯露之间差异不显著。
2.6 FRAP 值分析
2.6.1 硫酸亚铁标准曲线
硫酸亚铁标准曲线见图8，线性回归方程为y=0.756 7x+0.002 5，相关系数R2=0.992。
图8 硫酸亚铁标准曲线
Fig.8 Standard curve of ferrous sulfate
2.6.2 不同玫瑰纯露FRAP值的比较
不同玫瑰纯露FRAP值见图9。
图9 不同玫瑰纯露FRAP值
Fig.9 Recovery capacity of different rose hydrosols for FRAP
不同大写字母表示品种间存在差异极显著（P＜0.01）。
由图9可知，丰花一号玫瑰纯露FRAP值最高，和滇红玫瑰纯露的FRAP值相差0.395 1 mmol/L，表示丰花一号玫瑰纯露的铁离子抗氧化能力较强，紫枝玫瑰纯露次之，且相差较小，滇红玫瑰最弱。丰花一号玫瑰纯露与紫枝玫瑰纯露FRAP值差异不显著，与其他3种玫瑰纯露差异极显著。
2.7 玫瑰纯露抗氧化能力和抗氧化物质含量相关性分析
玫瑰纯露抗氧化能力与总酚、总黄酮含量相关性分析见表1。
表1 玫瑰纯露抗氧化能力与总酚、总黄酮含量相关性
Table 1 Correlation between antioxidant activity and total phenol and total flavonoid content of rose hydrosols
注：*表示相关性显著（P＜0.05）；**表示相关性极显著（P＜0.01）。
项目总黄酮含量DPPH 自由基清除率ABTS+自由基清除率羟自由基清除率FRAP 值总酚含量0.933*0.915*0.817 0.965**0.830总黄酮含量DPPH 自由基清除率ABTS+自由基清除率羟自由基清除率0.982**0.964**0.935*0.848 0.956*0.930*0.884*0.876 0.864 0.943*
由表1可知，玫瑰纯露中总酚含量、总黄酮含量与DPPH自由基清除率、ABTS+自由基清除率、羟自由基清除率以及FRAP值之间均存在着正相关关系，总酚含量与羟自由基清除率、总黄酮含量与DPPH自由基清除率及ABTS+自由基清除率呈现出极显著的正相关性，总酚含量与DPPH自由基清除率、总黄酮含量与羟自由基清除率呈现出显著的正相关性，说明总酚和总黄酮在清除自由基增强抗氧化活性上起着重要作用。
综上所述，丰花一号玫瑰纯露的DPPH自由基清除能力、ABTS+自由基清除能力、FRAP值以及总黄酮含量最高；紫枝玫瑰纯露的羟自由基清除能力和总酚含量最高，两者的抗氧化活性相对较强。墨红玫瑰纯露的ABTS+自由基清除能力和总黄酮含量强于苦水玫瑰纯露，但其他测定指标均略低于苦水玫瑰纯露，滇红玫瑰纯露对DPPH自由基、ABTS+自由基、羟自由基清除能力、总酚和总黄酮含量、FRAP值相较于其他4种玫瑰纯露较低，说明其抗氧化活性最弱。
3 讨论与结论
本试验对5种不同玫瑰的纯露进行提取，研究不同玫瑰纯露的抗氧化活性，以及两种抗氧化物质（总黄酮和总酚）和4种抗氧化指标的相关性。结果发现，不同玫瑰品种的纯露对不同类型的自由基均具有一定的清除作用，且对不同类型的自由基的清除能力的强弱也不同。丰花一号玫瑰纯露对DPPH自由基、ABTS+自由基的清除能力最强，抗氧化活性最强，紫枝玫瑰纯露次之，均显著高于苦水玫瑰纯露、墨红玫瑰纯露、滇红玫瑰纯露；紫枝玫瑰纯露的总酚含量最高，羟自由基清除率也最高，丰花一号玫瑰纯露的总黄酮含量最高，DPPH自由基、ABTS+自由基的清除率最高。2种抗氧化物质和4种抗氧化指标之间均存在着正相关关系，纯露的组成成分中除了总黄酮和总酚外还含有萜烯类、氨基酸类、醇类、酯类等其他化合物[21]。不同玫瑰纯露的抗氧化活性还可能受到其他物质含量的影响，需要进一步深入的研究。
综上所述，在5种玫瑰纯露中，丰花一号玫瑰纯露抗氧化活性最强，紫枝玫瑰纯露次之，苦水玫瑰、墨红玫瑰纯露抗氧化活性较弱，滇红玫瑰纯露抗氧化活性最弱。综合考虑，丰花一号玫瑰纯露具有较强的抗氧化活性，因此，其在天然抗氧化剂、化妆品、食品加工、医疗保健等领域极具开发潜能，且具有广阔的研究空间。
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