氨基糖苷类抗生素（aminoglycosides，AGs）是由链霉菌或小单胞菌产生或经过半合成制得的一类水溶性的碱类抗生素。氨基糖苷类抗生素抗菌谱广，对大多数需氧革兰氏阳性菌（如沙门氏菌、大肠杆菌、巴氏杆菌、变形杆菌属等）有较强的杀菌作用[1]，且价格低廉，在畜禽养殖业上常用于治疗各类畜禽的感染性疾病，如呼吸道感染、泌尿生殖道感染、细菌性肠炎等[2]。氨基糖苷类抗生素具有严重的毒副作用，包括肾毒性、耳毒性、神经肌肉阻滞，此外还会影响肠道对脂肪、蛋白质、糖、铁等的吸收，亦可引起肠道菌群失调，发生厌氧菌或真菌的二重感染[3]。在畜禽养殖过程中，若在饲料中添加兽药或超剂量使用兽药，或不遵守休药期规定提前出栏等，均会导致药物在畜禽体内蓄积残留。食品中氨基糖苷类抗生素的残留会通过食物链和生物放大作用进入人体，进而对人体产生相应的毒副作用，给人体健康带来危害。为保证食品动物的食用安全并保障人体健康，世界各国对氨基糖苷类抗生素在不同动物不同组织中的最大残留量做出了明确的规定。欧盟委员会（European Commission，EC）规定链霉素在猪、牛的肌肉组织中的最大残留限量均为500 µg/kg[4]。《美国联邦法规》（Code of Federal Regulations，CFR）对链霉素在猪的其他可食用组织和鸡的可食用组织的最大残留限量规定为0.5 mg/kg [5]。日本对猪肉、鸡肉中链霉素/双氢链霉素总量的最大残留限量均为0.6 mg/kg[6]。我国GB 31650—2019《食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量》[7]对食品中安普霉素、庆大霉素、卡那霉素、新霉素、大观霉素、链霉素/双氢链霉素总量共7 种抗生素在畜禽肌肉、脂肪、肝、肾、蛋等组织的残留限量均作出了规定，如安普霉素仅用于兔、绵羊、猪、鸡口服，但绵羊泌乳期禁用，鸡产蛋期禁用；潮霉素B 允许做治疗用，但不得在猪、鸡的可食组织和鸡蛋中检出。
目前食品中氨基糖苷类兽药残留的检测方法主要有酶联免疫法[8]、快速检测[9-12]、微生物法[13-14]、液相色谱法[15-17]和液相色谱-质谱法[18-25]，这些方法优缺点各异，能满足不同监管目的检测需要。液相色谱-质谱法具有抗背景干扰能力强、灵敏度高、定量定性准确等优点，已成为目前痕量检测分析的重要手段。氨基糖苷类抗生素化合物分子中缺乏生色基团，传统的紫外或荧光检测器不能对其产生响应，使用质谱作为检测器即能解决这一问题。氨基糖苷类抗生素中含有多个羟基与氨基，极性强，导致其在常规的C18 反相色谱柱中保留很差甚至无法保留，通常通过加入离子对试剂来提高其在反相色谱上的保留。但离子对试剂会与色谱柱的活性位点结合，导致柱效降低；离子对试剂在色谱柱上亦很难冲洗干净，从而缩短色谱柱的使用寿命。在质谱检测中，离子对试剂对负离子响应极强，易残留，导致负离子的分析性能下降，对质谱检测器造成损害，严重限制了离子对试剂在反向色谱和质谱上的应用[26]。亲水作用色谱柱（hydrophilic interaction chromatography，HILIC）是一款专为保留和分离极性-离子型化合物所设计的一类色谱柱，它通过在固定相表面键合与水有很好亲和性的强极性基团（如酰胺基、羟基、两性离子等），使用含水的有机溶剂作为流动相，通过以分配作用为主导，偶极相互作用、氢键作用、吸附作用、离子相互作用的多种次级相互作用进行保留和分离作用使极性分子分离。当前，为解决氨基糖苷类抗生素在反向色谱柱上保留较弱甚至无法保留的难题，不少研究采用亲水相互作用色谱柱，如HILIC、Obelisc R、XDB-C18 等[27-30]。
本文通过对比不同键合相的亲水相互作用色谱柱的分离效果，采用HILIC 亲水作用色谱柱，通过不同的多次级相互作用对氨基糖苷类化合物进行保留和分离，并对前处理条件和仪器条件进行优化，建立超高效液相色谱-质谱法检测猪肉中16 种氨基糖苷类抗生素残留量的检测方法，以期为食品中氨基糖苷类抗生素残留的监管提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
猪肉样品：市售；水为超纯水；甲醇、乙腈（均为色谱纯）、乙酸铵（优级纯，≥98%）：德国默克公司；乙二胺四乙酸二钠（ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt，EDTA-2Na）（优级纯）、十二烷基磺酸钠（分析纯）、戊烷磺酸钠（≥98%）、辛烷磺酸钠（≥99%）：中国MACKLIN 公司；磷酸二氢钾、盐酸、三氯乙酸、Na2OH（均为分析纯）：国药集团化学试剂有限公司；硫酸链霉素（97.7%）、庆大霉素（89.2%）、盐酸大观霉素（99.9%）、硫酸卡那霉素（96.4%）、新霉素（80.1%）、硫酸安普霉素（86.3%）、潮霉素B（90.2%）、硫酸奈替米星（96.5%）、西索米星（95.0%）：上海安谱璀世标准技术服务有限公司；双氢链霉素（97.7%）：中国BePure 公司；妥布霉素（94.3%）、硫酸巴龙霉素（98.0%）：中国first standard 公司；异帕米星（98.6%）、丁胺卡那霉素（86.2%）、硫酸小诺霉素（80.0%）：中国CATO Research Chemicals 公司；硫酸依替米星（59.9%）：中国食品药品检定研究院；HLB 固相萃取柱（6 mL/200 mg）：美国沃特世科技有限公司；癸烷磺酸钠（98%）、己烷磺酸钠（分析纯）：美国Sigma-Aldrich 公司；庚烷磺酸钠（≥99.0%）：广东光华科技股份有限公司。
1.2 仪器与设备
Triple Qual 5500 三重四极杆配电喷雾电离（electrospray ionization，ESI）源：美 国AB SCIEX 公 司；LC1290 超高效液相色谱仪：美国Agilent 公司；S300H超声清洗仪：德国Elmasonic 公司；X3R 冷冻离心机：美国Thermo Fisher Scientific 公司；Milti Reax 漩涡混合器：中国heidolph 公司；Turbo Vap Lv 氮吹仪：德国biotage 公司；DRYFAST ECO 真空泵：美国WELCH 公司；Milli-Q A10 超纯水机：美国Millipore 公司；XSE205DU电子天平、MS303TS 电子天平：中国METTLER TOLEDO 公司。
1.3 方法
1.3.1 标准溶液配制
标准储备溶液：精密称取16 种氨基糖苷类药物标准物质，分别置于10 mL 容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，摇匀，得到浓度为1 mg/mL 的标准储备溶液。
混合标准中间液：分别精密移取1 mg/mL 的标准储备溶液1.0 mL，置于100 mL 容量瓶中，加水稀释并定容至刻度，摇匀，得到浓度为10 µg/mL 的混合标准中间液。
混合标准工作液：精密移取10 µg/mL 的混合标准中间液1.0 mL，置于10 mL 容量瓶中，用水稀释并定容至刻度，摇匀，得到浓度为1.0 µg/mL 混合标准工作液。
1.3.2 样品前处理
称取2.00 g 匀浆后的猪肉样品置于50 mL 离心管中，加入磷酸盐缓冲液（称取磷酸二氢钾1.36 g，用980 mL 水溶解，用HCl 调pH 值至4.0，分别加入EDTA-2Na 0.15 g、三氯乙酸20 g、戊烷磺酸钠8.81 g、己烷磺酸钠9.41 g 溶解并定容至1 000 mL，混匀）10 mL，涡旋振荡10 min，10 000 r/min、5 ℃离心10 min，取上清液转移至另一干净离心管中，用10 mol/L NaOH 调节pH值至4～5 后，过HLB 固相萃取柱（6 mL/200 mg）（HLB固相萃取柱预先用5 mL 甲醇、5 mL 水、5 mL 提取液活化），再用5 mL 水淋洗，真空抽干，最后用10 mL 0.5%甲酸甲醇洗脱并收集洗脱液。洗脱液于40 ℃氮气吹干，加入1.00 mL 1% 甲酸溶液∶乙腈=5∶5（体积比）溶解，涡旋1 min 使其溶解，过0.22 µm 滤膜，上机测定。
1.3.3 基质标准曲线制备
取10 份猪肉空白样品，按照1.3.2 的方法进行前处理后用40 ℃氮吹吹干。取1.3.1 制备的混合标准中间液适量，用1%甲酸溶液∶乙腈=5∶5（体积比）配制成50、100、250、500、750、1 000、1 500 ng/mL 的系列混合标准使用液，各取1.00 mL，分别置于1.3.2 方法得到的氮吹吹干的样品基质中，涡旋1 min 使其溶解，过0.22 µm滤膜，上机检测。以待测物的质量浓度为横坐标x，峰面积为纵坐标y，建立校正曲线，分析质量浓度x、峰面积y 是否有良好的线性，确定其线性及范围。
1.3.4 检出限、定量限的测定
取猪肉空白基质，在50 µg/kg 的添加水平下，以信噪比（S/N）=3，计算检出限（limit of detection，LOD）；以信噪比（S/N）=10，计算定量限（limit of quantitation，LOQ）。
1.3.5 仪器条件
色谱柱：Agilent Hilic plus（2.1 mm×100 mm，3.5 µm）；柱温：35 ℃；流动相A：1% 甲酸溶液；流动相B：乙腈；进样量：5 µL。流速和梯度洗脱程序详见表1。
表1 梯度洗脱程序
Table 1 Gradient elution program
运行时间/min 0.00 2.00 5.00 8.00 14.00 14.10 20.00流速/（µL/min）300.0 300.0 300.0 300.0 300.0 300.0 300.0流动相A/%5.0 5.0 35.0 95.0 95.0 5.0 5.0流动相B/%95.0 95.0 65.0 5.0 5.0 95.0 95.0
离子源：ESI；扫描方式：正离子；检测方式：多反应监测（multiple reaction monitoring，MRM）；离子源温度：550 ℃；离子化电压：5 500 V；气帘气压力：241 kPa；雾化气压力：414 kPa；辅助加热气：379 kPa；碰撞气：62 kPa。16 种氨基糖苷类化合物的质谱参数见表2。
表2 16 种氨基糖苷类化合物的质谱参数
Table 2 Mass spectrometry parameters for 16 aminoglycosides
化合物潮霉素B母离子（m/z）528.1链霉素582.2双氢链霉素584.4庆大霉素478.3子离子（m/z）177.1*352.0 263.3*246.3 263.3*246.3 322.3*157.2去簇电压/V 140.0 140.0 239.0 239.0 172.0 172.0 144.0 144.0碰撞电压/eV 38.0 32.0 44.0 51.0 39.0 50.0 20.0 27.0碰撞室出口电压/V 21.0 21.0 22.0 22.0 20.0 20.0 20.0 20.0
续表2 16 种氨基糖苷类化合物的质谱参数
Continue table 2 Mass spectrometry parameters for 16 aminoglycosides
注：*为定量离子对。
化合物壮观霉素母离子（m/z）333.3卡那霉素485.4丁胺卡那霉素586.3新霉素615.3妥布霉素468.2安普霉素540.2巴龙霉素616.3小诺霉素464.3奈替米星476.5西索米星448.3依替米星478.2异帕米星570.2子离子（m/z）189.3*140.2 324.3*163.3 425.4*324.0 455.2*323.3 163.3*205.1 377.8*217.4 293.4*324.4 322.2*160.4 299.4*458.5 271.2*254.3 350.4*191.1 411.2*453.5去簇电压/V 160.0 160.0 70.0 70.0 98.0 98.0 176.0 176.0 98.0 98.0 142.0 142.0 140.0 140.0 189.0 189.0 178.0 178.0 110.0 110.0 159.0 159.0 150.0 150.0碰撞电压/eV 27.0 30.0 23.0 33.0 27.0 28.0 32.0 32.0 30.0 28.0 37.0 32.0 34.0 29.0 19.0 31.0 26.0 21.0 26.0 28.0 21.0 31.0 27.0 23.0碰撞室出口电压/V 15.0 15.0 15.0 15.0 25.0 25.0 10.0 10.0 18.0 18.0 20.0 20.0 16.0 16.0 17.0 17.0 15.0 15.0 17.0 17.0 18.0 18.0 18.0 18.0
1.3.6 方法回收率和精密度的测定
分别向2.00 g 空白猪肉样品中添加1.3.1 的混合标准工作液，得到50、250、500 µg/kg 的16 种氨基糖苷类药物回收和精密度测试溶液，每个浓度各3 份平行对照。按照1.3.2 的方法进行前处理，按1.3.5 仪器条件上机检测。结果计算平均回收率（recovery，REC），以相对标准偏差（relative standard deviation，RSD）作为精密度的评价指标。
1.4 数据处理
质谱数据采用Analyst Software 软件进行采集分析，MultiQuant 软件进行数据积分、线性拟合及回收率和精密度计算。
2 结果与讨论
2.1 仪器条件的优化
2.1.1 色谱柱的选择
针对亲水性化合物在反相色谱上保留能力差的难点，本研究对比了Sielc oblisc R（2.0 mm×100 mm，5 µm）、Waters ACQUITY UPLC BEH HILIC（2.1 mm×100 mm，1.7 µm）、Agilent Poroshell 120 Hilic（4.6 mm×100 mm，2.7 µm）和Agilent Hilic plus（2.1 mm×100 mm，3.5 µm）不同规格型号的亲水相互作用色谱柱对16 种氨基糖苷类抗生素的分离效果。结果表明，含高耐水解性的强极性固定相Agilent Hilic plus（2.1 mm×100 mm，3.5 µm）能对16 种氨基糖苷类抗生素有更好的保留性，且峰形尖锐，对称性良好，故采用Agilent Hilic plus（2.1 mm×100 mm，3.5 µm），其分离效果见图1。
图1 16 种氨基糖苷类抗生素在Agilent Hilic plus 的保留效果图
Fig.1 The retention effects of 16 aminoglycoside antibiotics in Agilent Hilic plus
2.1.2 流动相的选择
氨基糖苷类抗生素含有氨基，正离子扫描时，在酸性环境下提供H+，更利于化合物质子化，故本研究考察0.01%甲酸溶液-乙腈、0.05%甲酸溶液-乙腈、0.1%甲酸溶液-乙腈、0.2%甲酸溶液-乙腈、1%甲酸溶液-乙腈对化合物质谱响应的影响。结果表明流动相酸度越高，氨基糖苷类化合物的响应越好，综合考虑色谱柱和仪器的耐受能力，最终确定使用1%甲酸溶液-乙腈作为流动相。
2.2 前处理条件的优化
2.2.1 提取条件的确定
本研究先考察了1%、2%、5% EDTA-2Na 的三氯乙酸对猪肉空白基质进行加标的提取情况，结果表明随着三氯乙酸浓度的增加，沉淀蛋白的效果越好，但使用5% 的三氯乙酸会出现部分化合物不出峰的情况，出峰的化合物有些响应较低，峰形较差，考虑可能是三氯乙酸浓度增大，提取溶液酸度增强而破坏掉了部分化合物，不同浓度三氯乙酸提取效果见图2。
图2 不同浓度三氯乙酸提取效果
Fig.2 The extraction effects of trichloroacetic acid with different concentrations
A、B、C 分别为1%、2%、3%三氯乙酸。
由图2 可知，当三氯乙酸浓度为2%时，各化合物峰形良好，响应值最高，故本研究使用含0.4 mmoL/L EDTA-2Na 和2% 三氯乙酸的磷酸盐缓冲液对空白猪肉基质加标提取。
磷酸盐缓冲液提取效果见图3。
图3 磷酸盐缓冲液提取效果
Fig.3 The extraction effect of phosphate buffer solution
A. 2%三氯乙酸；B.磷酸盐缓冲液（2%三氯乙酸）。
由图3 可知，使用含有磷酸盐缓冲液的提取液比不含有磷酸盐缓冲液的提取液对空白基质样品加标提取的结果更好，有较多的化合物出峰，而且峰形良好，但加标提取回收率效果不理想。
为获得更好的加标提取回收率，本研究考察了在提取液中分别添加0.1 mol/L 不同烷基磺酸盐离子对试剂对提取效果和峰形的影响，结果见表3。
表3 不同离子对试剂对回收率的影响
Table 3 The effects of different ion-pairing reagents on recovery
组分潮霉素B链霉素双氢链霉素丁胺卡那霉素卡那霉素安普霉素庆大霉素妥布霉素新霉素壮观霉素巴龙霉素小诺霉素西索米星奈替米星依替米星异帕米星回收率/%戊烷磺酸钠22.9 71.6 86.6 113.7 103.4 88.5 70.8 94.7 108.6 74.6 108.0 71.8 65.4 62.8 76.9 109.2己烷磺酸钠113.0 5.7 6.9 112.8 105.0 67.5 67.7 70.8 62.2 0.7 72.5 51.0 63.6 51.0 62.4 106.4庚烷磺酸钠81.6 0.6 2.9 53.7 84.1 32.9 9.3 26.4 17.1 0.9 35.0 16.3 23.2 19.2 19.2 74.0辛烷磺酸钠137.5 5.4 5.5 54.5 33.8 1.5 0.4 3.6 2.3 0.3 3.1 1.2 2.1 1.5 1.4 49.8癸烷磺酸钠48.2 1.1 3.1 19.5 21.1 5.0 1.0 10.8 11.4 0.5 1.9 3.7 5.8 4.2 5.4 17.0十二烷基磺酸钠7.8 10.2 22.1 1.3 0.7 0.8 10.7 1.3 3.1 45.0 2.2 11.3 12.7 22.3 30.2 1.3十二烷基硫酸钠12.0 0.1 0.7 10.6 11.6 7.5 1.7 10.4 12.5 0.2 5.1 2.9 7.3 5.2 5.7 8.8
由表3 可知，随着碳链的延长，提取时产生的泡沫越多，难以涡旋，离心后溶液浑浊，过柱慢，氮吹后有残渣不利于检测分析，且回收率越低；使用含戊烷磺酸钠的提取液提取后所有组分全部出峰，除潮霉素B 回收率偏低外，其余化合物回收较好；使用己烷磺酸钠时，除链霉素、双氢链霉素、壮观霉素、奈替霉素和小诺霉素回收率偏低外，其余回收率较好。因此，为保证所有目标物均能提取完全并拥有较高的响应值，本研究同时采用戊烷磺酸钠和己烷磺酸钠作为提取液的离子对试剂。
本研究还考察分别在提取液中添加0.02、0.05、0.10、0.20 mol/L 的离子对试剂（戊烷磺酸钠和己烷磺酸钠）对回收率的影响，结果见图4。
图4 不同浓度离子对试剂对回收率的影响
Fig.4 The effects of different ion-pairing reagent concentrations on recovery
由图4 可知，潮霉素B 的回收率随着离子对试剂浓度的增加而增高，妥布霉素、新霉素和巴龙霉素的回收率随着添加的离子对试剂浓度的增加而降低。当浓度达到0.05 mol/L 时，潮霉素B、妥布霉素、新霉素和巴龙霉素的回收率满足要求，其他化合物的回收率随离子对试剂浓度的改变没有明显变化，综合考虑，提取液中戊烷磺酸钠和己烷磺酸钠的浓度为0.05 mol/L。
2.2.2 净化条件的优化
本研究考察了MCX、HLB、C18、WCX 和PBA 5 种不同的固相萃取柱对氨基糖苷类化合物的保留效果，结果见图5。
图5 不同填料固相萃取柱保留效果
Fig.5 The retention effects of solid-phase extraction columns with different fillers
由图5 可知，混合型离子交换柱HLB 对所有化合物均有保留，WCX 对庆大霉素、新霉素、小诺霉素、西索米星和奈替米星无保留，C18 对庆大霉素、妥布霉素、新霉素、巴龙霉素、小诺霉素、西索米星、奈替米星、依替米星有保留，MCX、PBA 对大部分化合物无保留。因此选择HLB 固相萃取柱用于样品提取液的净化。
通过对Waters HLB（3 mL/60 mg）、Waters HLB（6 mL/150 mg）、Waters HLB（6 mL/200 mg）、Waters HLB（6 mL/500 mg）和岛津HLB（6 mL/200 mg）不同规格的HLB 固相萃取柱保留效果进行考察，结果见图6。
图6 不同HLB 固相萃取柱保留效果
Fig.6 The retention effects of different HLB solid-phase extraction columns
由图6 可知，相较于其他固相萃取柱，Waters HLB（6 mL/200 mg）可以更多的保留化合物，基质效应较小。
2.3 方法学验证
线性关系、检出限、定量限结果详见表4，回收率、精密度详见表5。
表4 16 种氨基糖苷类化合物的线性范围、线性方程、相关系数、检出限和定量限
Table 4 The linear ranges， linear equations， correlation coefficients， LODs， and LOQs of 16 aminoglycosides
序号1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16组分潮霉素B链霉素双氢链霉素丁胺卡那霉素卡那霉素安普霉素庆大霉素妥布霉素新霉素壮观霉素巴龙霉素小诺霉素西索米星奈替米星依替米星异帕米星线性范围/（ng/mL）50～1 500 50～1 500 50～1 500 50～1 500 50～1 500 50～1 500 50～1 500 50～1 500 50～1 500 50～1 500 50～1 500 50～1 500 50～1 500 50～1 500 50～1 500 50～1 500线性方程y=3 424.274 27x-21 836.4 y=446.504 44x-10 730.1 y=1 737.546 41x+119 206.0 y=4 981.488 93x-158 107.0 y=2 974.237 34x-95 452.1 y=348.884 15x+1 276.6 y=931.884 12x-12 179.1 y=3 670.743 59x-102 562.0 y=509.357 82x-5 966.3 y=3 860.304 09x-62 134.1 y=790.842 32x+20 225.9 y=1 819.687 01x-63 011.7 y=1 976.158 18x-86 586.6 y=2 350.181 47x+12 697.4 y=2 930.924 99x-85 038.5 y=3 299.631 74x-32 056.6相关系数0.993 0.999 0.999 0.998 0.998 0.996 0.998 0.997 0.996 0.998 0.998 0.998 0.998 0.999 0.996 0.997 LOD/（µg/kg）12.8 19.7 3.8 15.3 17.2 17.7 14.2 12.1 15.0 14.6 18.8 9.0 7.0 7.8 7.8 6.3 LOQ/（µg/kg）42.7 65.8 12.5 51.0 57.5 58.8 47.2 40.3 50.0 48.5 62.5 29.9 23.5 25.9 25.9 21.0
表5 16 种氨基糖苷类化合物的回收率和精密度
Table 5 The recovery and precision of 16 aminoglycosides
化合物潮霉素B化合物新霉素链霉素壮观霉素双氢链霉素巴龙霉素丁胺卡那霉素小诺霉素卡那霉素西索米星安普霉素奈替米星庆大霉素依替米星妥布霉素添加水平/（µg/kg）50 250 500 50 250 500 50 250 500 50 250 500 50 250 500 50 250 500 50 250 500 50 250 500 REC/%93.5 85.4 80.8 102.5 91.9 84.4 102.7 90.9 90.4 112.5 95.3 93.5 109.9 85.1 84.1 83.0 79.6 91.3 99.4 102.7 105.5 91.2 84.6 85.1 RSD/%11.5 5.6 10.9 10.0 13.5 10.0 13.2 14.5 13.9 4.9 11.0 14.1 3.9 6.3 6.2 5.5 7.5 6.3 4.7 4.2 11.0 4.8 4.5 7.4异帕米星添加水平/（µg/kg）50 250 500 50 250 500 50 250 500 50 250 500 50 250 500 50 250 500 50 250 500 50 250 500 REC/%115.3 81.7 84.4 98.3 84.8 82.9 95.0 82.5 93.4 105.9 99.0 98.2 109.5 86.5 91.1 105.4 103.5 111.8 112.4 93.3 98.0 110.6 111.3 106.1 RSD/%1.4 7.4 7.0 8.0 2.3 5.4 14.6 6.6 13.1 9.3 1.8 7.7 3.6 3.6 10.8 3.6 7.8 0.8 3.7 7.5 8.0 5.1 2.2 1.9
由表4 可知，16 中氨基糖苷类抗生素在50～1 500 ng/mL 有良好的线性关系，相关系数均大于0.99，各化合物的检出限在3.8～19.7 µg/kg，定量限在12.5～65.8 µg/kg，可以满足氨基糖苷类抗生素日常检测的需求。由表5 可知，16 种氨基糖苷类抗生素3 种添加水平（50、250、500 µg/kg）的平均回收率和相对标准偏差均较好，平均回收率在79.6%～115.3%，相对标准偏差在0.8%～14.6%，满足食品检测方法验证的要求。
2.4 实际样品检测
采用本方法对市售的134 批次猪肉样品进行检验，其中4 批样品图谱中有检出卡那霉素、巴龙霉素、妥布霉素、庆大霉素质谱峰，样品检测结果见图7。
图7 样品检测结果
Fig.7 Sample test results
由图7 可知，信噪比均低于检出限信噪比（3∶1），故样品均未检出上述16 种氨基糖苷类抗生素。
3 结论
本研究基于以分配作用为主导，偶极相互作用、氢键作用、吸附作用、离子相互作用的多次级相互作用进行保留和分离，并对前处理、液相色谱和质谱条件进行优化，建立一种能同时检测猪肉中16 种氨基糖苷类抗生素残留量的新方法。本方法前处理简便，方法稳定性好、准确性、灵敏度高，有良好的信噪比，为猪肉中氨基糖苷类兽药残留的检测提供了技术支持，可以满足猪肉中氨基糖苷类抗生素残留的监管需要。
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