蛹虫草（Cordyceps militaris）又称北冬虫夏草，与冬虫夏草同属异种，是虫草属的模式种。蛹虫草中含有多糖、核苷、虫草素、甾醇和色素等多种生物活性物质，其中多糖是含量最丰富、最重要的成分之一[1]。近年来，蛹虫草多糖因具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、降血脂、抗糖尿病、抗动脉粥样硬化、免疫调节等多种作用而备受关注。β-葡聚糖是一类具有抗氧化、降血糖以及益生等作用的活性多糖，也是菌菇多糖的重要组成。近年来，对于菌菇中β-葡聚糖的研究逐渐增多，如陈忠秋[2]通过研究猴头菇β-葡聚糖对淀粉消化作用的影响确定其有预防糖尿病的作用；姚丽云[3]通过研究表明香菇β-葡聚糖可作为抗癌症辅助药。而关于蛹虫草β-葡聚糖的提取及生物活性的研究内容鲜有报道。本研究通过单因素试验及响应面试验探究蛹虫草β-葡聚糖的提取工艺，采用红外扫描分析提取物的化学键及官能团信息，测定其中各组分含量，对其DPPH 自由基、ABTS+自由基、羟基自由基清除率进行比较，为其在功能食品或药品方面的进一步开发和利用提供依据。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
蛹虫草：福建菌妍生物科技有限公司；α-淀粉酶（50 U/mg）：上海麦克林生化科技有限公司；葡萄糖氧化酶试剂盒（glucose oxidase-peroxidase，GOPOD）：北京盒子生工科技有限公司；乙醇、可溶性淀粉标准品、三氯甲烷、没食子酸、正丁醇、1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）、2，2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐[2，2'-azinobis-（3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate），ABTS]、VC（均为分析纯）：四川西陇化工股份有限公司；蛋白质印记（bicinchoninic acid，BCA）检测试剂盒：上海嘉楚生物工程有限公司。
DF-101S 集热式恒温加热磁力搅拌器：巩义市予华仪器有限责任公司；Hei-VAP Value G3 旋转蒸发仪：德国Heidolph 公司；UH5300 紫外-可见分光光度计：日本岛津公司；AKTA pure 150 蛋白纯化系统（GE）：思拓凡（中国）有限公司；MULTISKAN Sky 全波长酶标仪：赛默飞世尔科技（中国）有限公司；DZF6050中型真空干燥箱：上海一恒科学仪器有限公司；SCIENTZ-30FG/A 冷冻干燥机：宁波新芝冻干设备股份有限公司；VERTEX70 傅里叶红外光谱仪：美国Bruker公司。
1.2 试验方法
1.2.1 蛹虫草β-葡聚糖的提取工艺
蛹虫草样品→破壁机粉碎→过50 目筛→根据料液比加入蒸馏水→超声提取（500 W）→水提→离心取上清液（10 000 r/min，5 min）→加入α-淀粉酶孵育→旋蒸浓缩→4 ℃醇沉过夜（体积分数80%乙醇溶液）→离心收集沉淀（10 000 r/min，5 min）→无水乙醇洗涤2 次→恒温干燥箱50 ℃→蛹虫草β-葡聚糖粗品→Sevag 脱蛋白处理→透析去除小分子杂质（3 500 Da、12 h）→体积分数80% 乙醇溶液4 ℃沉淀过夜除杂→冷冻干燥→蛹虫草β-葡聚糖。
1.2.2 β-葡聚糖含量测定
参考Mccleary 等[4]的差异计算法，进行修改。
1）总葡聚糖含量测定：称取10 mg 样品→加入200 μL 12 mol/L 的硫酸（冰水浴120 min）→加入1.2 mL蒸馏水（沸水浴120 min）→加入600 μL 10 mol/L 的氢氧化钾→以醋酸钠缓冲溶液（pH5、200 mmol/L）定容至10 mL→离心吸取100 μL 上清液（10 000 r/min，5 min）→加入3 mL GOPOD 试剂（40 ℃，20 min）→于510 nm 测定吸光度。
2）α-葡聚糖含量及提取率的测定：称取100 mg 样品→加入2 mL 2 mol/L 氢氧化钾（冰水浴20 min）→加入8 mL 醋酸钠缓冲溶液（pH4、200 mmol/L）→加入1 mL α-淀粉酶（1 mg/mL）于50 ℃孵育60 min→离心取上清液（10 000 r/min，5 min）→加入3 mL GOPOD 试剂于40 ℃孵育20 min→于510 nm 测定吸光度。
以无水葡萄糖作为标准品，吸光度A 为横坐标，浓度C 为纵坐标，求得葡萄糖标准曲线的回归线方程为C=0.572 6A+0.04，R²=0.993 3，按公式（1）计算提取物中总葡聚糖及α-葡聚糖含量（P，%）。
式中：C 为葡萄糖质量浓度，mg/mL；V 为提取液总体积，mL；M 为样品的质量，mg。
β-葡聚糖含量（T，mg/mL）按公式（2）计算。
式中：P1 为总葡聚糖质量浓度，mg/mL；P2 为α-葡聚糖质量浓度，mg/mL。
β-葡聚糖提取率（J，%）按公式（3）计算。
式中：M1 为提取物质量，mg；C 为提取物β-葡聚糖含量，%；M2 为样品质量，mg。
1.2.3 β-葡聚糖提取单因素试验
按照1.2.1 中的方法，在料液比1∶30（g/mL）、超声时间60 min，水浴温度90 ℃的条件下，考察0、1、2、3、4 h 水浴提取时间对蛹虫草β-葡聚糖提取率的影响；在最优水浴提取时间、水浴温度90 ℃、料液比1∶30（g/mL）条件下，考察0、0.5、1.0、1.5、2.0 h 超声时间对蛹虫草β-葡聚糖提取率的影响；在最优超声时间和水浴提取时间，料液比1∶30（g/mL）的条件下，分别考察60、70、80、90、100 ℃水浴温度对蛹虫草β-葡聚糖提取率的影响；在最优水浴温度、水浴提取时间及超声时间的条件下，考察料液比1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50（g/mL）对蛹虫草β-葡聚糖提取率的影响[5]。
1.2.4 β-葡聚糖提取响应面试验
以蛹虫草β-葡聚糖提取率作为响应值，根据1.2.3中的试验结果，设计三因素三水平的Box-Behnken 的中心组合试验，对蛹虫草β-葡聚糖提取工艺进行优化，响应面因素水平设计见表1。
表1 响应面因素水平
Table 1 Factors and levels of response surface
水平-1因素0 1 A 超声时间/h 0 1.0 2.0 B 料液比/（g/mL）1∶20 1∶30 1∶40 C 水浴温度/℃80 90 100
1.2.5 β-葡聚糖的纯化
1.2.5.1 α-葡聚糖及蛋白质去除工艺
将制备所得蛹虫草β-葡聚糖粗品配制为10 mg/mL样品溶液，设定酶解条件为α-淀粉酶添加量2%、孵育时间60 min、温度50 ℃，获得酶解液。三氯甲烷与正丁醇按照体积比4∶1 配制Sevag 试剂，按体积比4∶1将样品酶解液与Sevag 试剂混合并剧烈振摇20 min，随后于高速离心机（10 000 r/min，5 min）离心，吸取中间蛋白层。重复以上操作至离心后无中间蛋白层。
1.2.5.2 透析去除小分子杂质
将1.2.5.1 处理后的样品溶液，置于3 500 Da 的透析袋中，于活水中透析24 h，而后加入乙醇至乙醇体积分数为80%，于4 ℃醇沉过夜，以去除样品中的小分子杂质及残留的Sevag 试剂。高速离心（10 000 r/min 5 min）取沉淀，用无水乙醇洗涤2 次，置于冷冻干燥机中冻干得到蛹虫草β-葡聚糖[6]。
1.2.6 蛹虫草β-葡聚糖特征组分测定
1.2.6.1 特征组分含量测定
对蛹虫草中几个特征组分进行测定，并对比蛹虫草β-葡聚糖纯化前后各个组分含量，确定样品中的组成成分及占比。
1）总糖含量测定：采用苯酚-硫酸法测定[7]。以葡萄糖标准品绘制标准曲线。将蛹虫草β-葡聚糖配制成0.1 mg/mL 溶液，采用苯酚-硫酸法测定蛹虫草β-葡聚糖中总糖含量。
2）蛋白质含量测定：以牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）为标准品，于562 nm 波长下进行梯度浓度测定并绘制标准曲线。将蛹虫草β-葡聚糖配制成0.1 mg/mL 溶液，采用BCA 检测试剂盒检测蛹虫草β-葡聚糖中蛋白含量[8]。
3）糖醛酸含量测定：采用硫酸-咔唑法测定[9]，在530 nm 波长下对糖醛酸标准品进行梯度浓度测定，并绘制标准曲线。将蛹虫草β-葡聚糖配制成1 mg/mL溶液，测定蛹虫草β-葡聚糖中的糖醛酸含量。
4）硫酸基含量测定：采用氯化钡-明胶比浊法[10]，在360 nm 波长下对硫酸基标准品进行梯度浓度测定，并绘制标准曲线。将蛹虫草β-葡聚糖配制成0.1 mg/mL溶液，测定蛹虫草β-葡聚糖中的硫酸基含量。
1.2.6.2 结构分析
取经过纯化操作后的干燥蛹虫草β-葡聚糖2 mg，加入200 mg 经过干燥的KBr 晶体，研磨混合后压片，进行红外吸收光谱分析[11]。
1.2.7 蛹虫草β-葡聚糖体外抗氧化能力测定
配制10 mg/mL 的蛹虫草β-葡聚糖溶液，用高纯水稀释至不同浓度，分别测定样品在不同浓度下对DPPH 自由基、ABTS+自由基以及羟基自由基的清除能力，按公式（4）进行计算自由基清除率（Z，%）[12-15]，并以Graph Pad Prism9 软件计算其IC50。
式中：A1 为样品组的吸光度；A2 为以缓冲液取代反应试剂的吸光度；A0 为以去离子水取代样品的吸光度。
1.2.7.1 DPPH 自由基清除率
以无水乙醇将蛹虫草β-葡聚糖样品配制为2、4、6、8、10 mg/mL 的溶液，取2 mL 于试管中，加入2 mL DPPH 无水乙醇溶液（200 μmol/L）。混匀后在室温下避光反应30 min，于517 nm 处测定吸光度[16]。
1.2.7.2 ABTS+自由基清除率
7 mmol/L ABTS 溶液与4.9 mmol/L 过硫酸钾溶液以1∶1（体积比）充分混匀，室温避光放置12～16 h，获得ABTS+储备液。使用前用超纯水稀释，使得稀释液在734 nm 处的吸光度为0.70±0.02，现用现配。取不同浓度蛹虫草β-葡聚糖样品溶液200 μL 加入4 mL ABTS稀释液中，反应6 min，于724 nm 处测定吸光度[17]。
1.2.7.3 羟基自由基清除率
取1 mL 不同浓度蛹虫草β-葡聚糖样品、2 mL 1.5 mmol/L 亚硫酸铁、0.6 mL 20 mmol/L 水杨酸、1.4 mL 3% 过氧化氢，避光反应30 min 后测定510 nm 处吸光度[18]。
1.3 数据处理
采用软件Design-Expert 13 设计响应面优化试验，采用软件Origin 2022 进行数据分析和作图。所有试验均重复3 次，试验结果表示为平均值±标准差。
2 结果与讨论
2.1 单因素试验分析
选取蛹虫草β-葡聚糖提取过程中主要的几个影响因素，设置不同的条件，进行单因素试验，为后续响应面分析最佳提取条件提供试验依据。
2.1.1 水浴提取时间对β-葡聚糖提取率的影响
不同水浴提取时间对蛹虫草β-葡聚糖提取率的影响如图1 所示。
图1 不同水浴提取时间对蛹虫草β-葡聚糖提取率的影响
Fig.1 Effect of different water bath extraction time on the extraction rate of β-glucan from C.militaris
不同小写字母表示差异显著（P＜0.05）。
由图1 可知，在0～4 h 内，β-葡聚糖提取率随水浴提取时间的延长呈先上升后下降的趋势。随着时间延长，能溶出更多β-葡聚糖，在2 h 时β-葡聚糖提取率达到最大，为（1.94±0.02）%；而水浴提取时间继续延长，提取率反而下降，可能是因为水浴提取时间2 h时，β-葡聚糖已经基本溶出，继续提取会导致β-葡聚糖部分降解，所以提取率后期呈现下降趋势[19]。因此，确定2 h 为最佳水浴提取时间。
2.1.2 超声时间对β-葡聚糖提取率的影响
不同超声时间对蛹虫草β-葡聚糖提取率的影响如图2 所示。
图2 不同超声时间对蛹虫草β-葡聚糖提取率的影响
Fig.2 Effect of different ultrasound time on the extraction rate of β-glucan from C.militaris
不同小写字母表示差异显著（P＜0.05）。
由图2 可知，在超声时间为0～2.0 h 时，蛹虫草β-葡聚糖提取率随超声时间延长呈先上升后下降的趋势。随着时间延长，超声波的空化效应、热效应和破碎作用逐渐增强，加速蛹虫草细胞壁破裂和水溶性物质溶出。在超声时间1.0 h 时β-葡聚糖提取率达到最大，为（1.94±0.01）%；而超声时间过长，可能会破坏β-葡聚糖结构，导致β-葡聚糖降解，所以β-葡聚糖提取率后期呈现下降趋势[20]。因此，选择超声提取时间0、1.0、2.0 h 进行后续试验。
2.1.3 水浴温度对β-葡聚糖提取率的影响
不同水浴温度对蛹虫草β-葡聚糖提取率的影响如图3 所示。
图3 不同水浴温度对蛹虫草β-葡聚糖提取率的影响
Fig.3 Effect of different water bath temperatures on the extraction rate of β-glucan from C.militaris
不同小写字母表示差异显著（P＜0.05）。
由图3 可知，在水浴温度60～100 ℃时，蛹虫草β-葡聚糖提取率随水浴温度升高呈先上升后下降的趋势。随着水浴温度升高，样品中水溶性物质溶出速度加快，提取率随之提高，当温度为90 ℃时，β-葡聚糖提取率达到最大，为（1.95±0.02）%。进一步提高水浴温度后，可能导致β-葡聚糖糖苷键水解，使得提取率下降[21]。因此，选择水浴温度80、90、100 ℃进行后续试验。
2.1.4 料液比对β-葡聚糖提取率的影响
不同料液比对蛹虫草β-葡聚糖提取率的影响如图4 所示。
图4 不同料液比对蛹虫草β-葡聚糖提取率的影响
Fig.4 Effect of different material-liquid ratios on the extraction rate of β-glucan from C.militaris
不同小写字母表示差异显著（P＜0.05）。
由图4 可知，在料液比为1∶10～1∶50（g/mL）时，蛹虫草β-葡聚糖提取率随提取溶剂添加量增加呈先上升后下降的趋势。随着提取溶剂添加量增加，溶剂与溶质接触面积增大，分子扩散速度大，提取率随之提高，当料液比为1∶30（g/mL）时，提取率达到最大，为（1.95±0.01）%。进一步增加提取溶剂后，溶剂吸收了部分超声能量，使超声破壁效果下降，提取率降低[22]。因此，选择料液比1∶20、1∶30、1∶40（g/mL）进行后续试验。
2.2 响应面优化试验结果与分析
2.2.1 响应面模型建立及方差分析
根据单因素试验结果，并结合Box-Behnken 的试验设计原理，以超声时间（A）、料液比（B）、水浴温度（C）为自变量，提取率（Y）为响应值，采用Design-Expert 13 软件设计Box-Behnken 三因素三水平的试验对蛹虫草β-葡聚糖的提取工艺进行优化。蛹虫草β-葡聚糖提取工艺的响应面优化试验结果见表2。
表2 拟合方程模型的方差分析
Table 2 Analysis of variance on fitted equation models
来源模型自由度A B C AB显著性******AC BC平方和0.735 1 0.044 3 0.029 4 0.000 1 0.000 2 0.001 6 0.000 2 9 1 1 1 1 1 1均方0.151 1 0.082 0 0.054 5 0.000 1 0.000 4 0.003 0 0.000 4 F 值80.15 43.51 28.89 0.059 7 0.212 2 1.60 0.212 2 P 值＜0.000 1 0.000 3 0.001 0 0.814 0 0.659 0 0.245 7 0.659 0
续表2 拟合方程模型的方差分析
Continue table 2 Analysis of variance on fitted equation models
注：*表示影响显著（P＜0.05），**表示影响极显著（P＜0.01）。
来源自由度A2 B2 C2 1 1 1 7 3 4 16平方和0.265 8 0.254 3 0.075 1 0.007 1 0.002 6 0.004 4 0.742 3均方0.491 8 0.470 4 0.139 1 0.001 9 0.001 6 0.002 1 F 值260.88 249.56 73.79 P 值＜0.000 1＜0.000 1＜0.000 1显著性******残差失拟项误差总和0.781 2 0.563 0
通过Design-Expext 13 软件对结果进行二元回归拟合分析，得到回归方程：Y=1.95+0.074 4A+0.060 7B+0.002 8C+0.007 4AB-0.020 2AC+0.007 4BC-0.251 3A²-0.245 8B²-0.133 6C²。
由表2 可知，试验模型的F 值为80.15，P 值小于0.000 1，模型R2=0.990 4，说明该模型极显著，具有很好的拟合度。失拟项F 值为0.781 2，P 值为0.563 0，表明失拟项不显著，非试验性因素对试验结果影响较小。校正R2Adj=0.978 0 和预测R2Pred=0.933 7 均大于0.9，且差异小于0.2，变异系数为1.94%，表明该模型误差小，可靠性高，该模型的回归方程成立。
F 值代表提取因素对提取率的影响程度，F 值越高说明该提取因素对提取率的影响程度越显著，而FA=43.51，FB=28.89，FC=0.059 7，由此可知超声时间及料液比对蛹虫草β-葡聚糖提取率的影响达到极显著影响水平，水浴温度则不显著，影响程度A＞B＞C，3 种影响因素的二次项都对结果存在极显著影响，影响程度为A2＞B2＞C2。
2.2.2 提取因素的交互作用分析
提取因素的交互作用分析结果见图5。
图5 各两因素交互作用对β-葡聚糖提取率影响的响应面与等高线图
Fig.5 Response surface and contour plot of the interaction of each two factors on the extraction rate of β-glucan
c 料液比与水浴温度交互作用
由图5 可知，提取过程中各因素交互作用的3D曲面图过度平缓，表明两因素间的相互影响不显著，与表2 中的方差分析结果相同，各因素间交互作用对β-葡聚糖提取率的影响程度为AC＞AB=BC。
2.2.3 最佳工艺的验证
应用响应面优化各因素可得蛹虫草β-葡聚糖提取最优工艺参数：超声时间1.28 h、料液比1∶31.26（g/mL）、水浴温度89.93 ℃，预测提取率为1.95%。为便于实际操作将其修正为超声时间1 h、料液比1∶31（g/mL）、水浴温度90 ℃。在该条件下进行验证，实际提取率为（1.94±0.20）%，该值与预测值基本相符，表明该最优工艺参数可行。
2.3 蛹虫草β-葡聚糖的纯化及结构分析
对纯化前后主要成分的含量进行了测定，结果见表3。
表3 蛹虫草β-葡聚糖处理前后各组分的含量
Table 3 Content of each component before and after treatment of C.militaris β-glucan %
组别处理前处理后β-葡聚糖19.75 33.93总糖44.13 53.35蛋白质41.02 28.33糖醛酸18.49 30.12硫酸基2.32 4.11
由表3 可知，纯化后蛹虫草β-葡聚糖中蛋白质含量由41.02% 减少至28.33%，β-葡聚糖含量由19.82%提升至33.93%，表明Sevag 法纯化对于蛋白质的去除有一定效果，但无法彻底去除，同时考虑到Sevag 试剂在食品行业中应用的局限性，后续对于蛹虫草β-葡聚糖功能和结构的深入研究需要进一步优化其蛋白质的脱除工艺。糖类成分分析结果显示，在透析去除了小分子的游离糖及寡糖后，样品中除了β-葡聚糖外，基本为糖醛酸，其中部分糖醛酸作为β-葡聚糖的组成[23]。采用离子交换等方法，去除大分子糖醛酸，进一步明确蛹虫草β-葡聚糖的结构和功能，将是后续工作的重点。
利用红外光谱扫描对蛹虫草β-葡聚糖中的化学键及官能团进行分析，结果如图6 所示。
图6 蛹虫草β-葡聚糖的红外光谱图
Fig.6 Infrared spectrum of C.militaris β-glucan
由图6 可知，3 440.62 cm-1 的吸收峰为蛹虫草β-葡聚糖的羟基振动峰；2 926.74 cm-1 和2 858.40 cm-1为甲基或亚甲基C—H 的伸缩振动峰；1 635.81 cm-1 为羰基C O 的伸缩振动峰；1 395.91 cm-1 为C—H 的变角振动峰，通过以上特征峰可以判断样品为一种多糖物质。1 244.67 cm-1 为硫酸根中S O 的特征峰，说明样品中存在硫酸根基团；1 200～1 000 cm-1 处吸收峰表示C—O 伸缩的吡喃环振动[24]。综上，蛹虫草β-葡聚糖具有典型的多糖结构，并含有硫酸根基团。
2.4 蛹虫草β-葡聚糖体外抗氧化活性
选择ABTS+自由基、DPPH 自由基和羟基自由基的清除能力作为蛹虫草β-葡聚糖抗氧化活性的评价指标[25]，试验结果如图7 所示。
图7 不同浓度蛹虫草β-葡聚糖和VC 的抗氧化活性
Fig.7 Antioxidant activity of C.militaris β-glucan and VC at different concentrations
A.DPPH 自由基清除率；B.ABTS+自由基清除率；C.羟基自由基清除率。
由图7 可知，蛹虫草β-葡聚糖对3 种自由基均展现出不同程度的清除能力。在2～10 mg/mL 的浓度范围内，蛹虫草β-葡聚糖对DPPH 自由基的清除率为55.71%～100%，IC50 为1.17 mg/mL；对羟基自由基的清除率为30.00%～98.63%，IC50 为4.35 mg/mL；对ABTS+自由基的清除率为43.82%～100%，IC50 为2.17 mg/mL。蛹虫草β-葡聚糖浓度为2～10 mg/mL 时，对3 种自由基都有明显的清除活性，通过线性拟合计算得出DPPH 自由基、ABTS+自由基、羟基自由基分别于蛹虫草β-葡聚糖质量浓度为8.34、9.88、9.97 mg/mL 时达到与VC 相同的100% 清除效率，最大自由基清除能力优于蓝莓果渣多糖、虎奶菇多糖及废啤酒酵母β-葡聚糖等[26]。
3 结论
本研究在单因素试验的基础上，采用响应面法优化蛹虫草β-葡聚糖的提取工艺，方差分析结果表明，影响蛹虫草β-葡聚糖提取得率因素的主次顺序为超声时间＞料液比＞水浴温度。通过响应面法得到的最优提取工艺为超声时间1 h、料液比1∶31（g/mL）、水浴温度90 ℃。该工艺得到蛹虫草β-葡聚糖提取率为（1.94±0.20）%，纯度（19.75±2.60）%。经过纯化后蛹虫草β-葡聚糖中蛋白质含量由41.02% 减少至28.33%，β-葡聚糖含量由19.82%提升至33.93%。通过红外光谱扫描分析，表明提取得到的蛹虫草β-葡聚糖具有典型的多糖结构，并含有硫酸根基团。提取所得蛹虫草β-葡聚糖具有较好的体外抗氧化活性，对DPPH 自由基、ABTS+自由基、羟基自由基清除效率与其浓度正相关，IC50值分别为1.17、2.17、4.35 mg/mL，并分别在8.34、9.88、9.97 mg/mL 时达到最大清除效率。本研究建立了蛹虫草β-葡聚糖最佳提取工艺，获得了具有良好的体外抗氧化活性的蛹虫草β-葡聚糖，为蛹虫草资源的后续研究和深度开发提供参考。
[1] 李佩瑶,高睿晗,兰春阳,等.蛹虫草多糖免疫调节机制的研究进展[J].中国免疫学杂志,2023,39(6):1342-1345.LI Peiyao, GAO Ruihan, LAN Chunyang, et al.Research progress on immune regulation mechanism of Cordyceps militaris polysaccharide[J].Chinese Journal of Immunology, 2023, 39(6): 1342-1345.
[2] 陈忠秋.猴头菇β-葡聚糖对小麦淀粉消化性的影响及其机理研究[D].上海:上海应用技术大学,2018.CHEN Zhongqiu.Study on the effect of β-glucan from Hericium erinaceus on the digestibility of wheat starch and its mechanism[D].Shanghai:Shanghai Institute of Technology,2018.
[3] 姚丽云.香菇β-葡聚糖分离分析及抗肿瘤效果的研究[D].漳州:闽南师范大学,2018.YAO Liyun.Structural analysis and study on antitumor effect of Letinous edodes β-glucan[D].Zhangzhou: Minnan Normal University,2018.
[4] MCCLEARY B V, DRAGA A.Measurement of β-glucan in mushrooms and mycelial products[J].Journal of AOAC International,2016,99(2):364-373.
[5] NUERXIATI R,ABUDUWAILI A,MUTAILIFU P,et al.Optimization of ultrasonic-assisted extraction,characterization and biological activities of polysaccharides from Orchis chusua D.Don (Salep)[J].International Journal of Biological Macromolecules,2019,141:431-443.
[6] LAN L, WANG S Y, DUAN S H, et al.Cordyceps militaris carotenoids protect human retinal endothelial cells against the oxidative injury and apoptosis resulting from H2O2[J].Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: ECAM, 2022, 2022:1259093.
[7] 王彦平,娄芳慧,陈月英,等.苯酚-硫酸法测定紫山药多糖含量的条件优化[J].食品研究与开发,2021,42(4):170-174.WANG Yanping, LOU Fanghui, CHEN Yueying, et al.Optimization of analytical conditions for the determination of polysaccharides contents in purple yam by phenol-sulfuric acid method[J].Food Research and Development,2021,42(4):170-174.
[8] 王丽,王吟,胡业勤,等.BCA 法检测组分百日咳疫苗中间品蛋白含量的可行性评价[J].中国生物制品学杂志, 2020, 33(9):1048-1053.WANG Li, WANG Yin, HU Yeqin, et al.Feasibility of BCA method for determination of protein content in intermediate product of component pertussis vaccine[J].Chinese Journal of Biologicals,2020,33(9):1048-1053.
[9] 任珍芸,陈晓航,王玺,等.硫酸-咔唑微孔板法检测肺炎链球菌荚膜多糖中糖醛酸含量[J].微生物学免疫学进展, 2017, 45(2):36-41.REN Zhenyun, CHEN Xiaohang, WANG Xi, et al.Determination of uronic acid content in pneumococcal polysaccharide by sulfatecarbazole method in microplate[J].Progress in Microbiology and Immunology,2017,45(2):36-41.
[10] 吴建军.氯化钡-明胶浊度法测定水质试样中微量硫酸根[J].分析试验室,1985,4(2):58.WU Jianjun.Determination of trace sulfate in water samples by barium chloride-gelatin turbidimetry[J].Analytical Laboratory,1985,4(2):58.
[11] 李亚童,阿依夏古丽·巴卡斯,李改茹,等.新疆芜菁酸性多糖分离纯化、抗氧化活性研究及红外表征[J].食品安全质量检测学报,2022,13(4):1050-1057.LI Yatong, Ayisha Guli Barkas, LI Gairu, et al.Isolation, purification, antioxidant activity exploration and infrared characterization of acidic polysaccharide from Xinjiang Brassica rapa L[J].Journal of Food Safety&Quality,2022,13(4):1050-1057.
[12] ZHONG W T, YANG C M, ZHANG Y Z, et al.Effects of different deproteinization methods on the antioxidant activity of polysaccharides from Flos sophorae immaturus obtained by ultrasonic microwave synergistic extraction[J].Agronomy,2022,12(11):2740.
[13] LIU L, JING Y, GUO A L, et al.Biosynthesis of platinum nanoparticles with Cordyceps flower extract: Characterization, antioxidant activity and antibacterial activity[J].Nanomaterials, 2022, 12(11):1904.
[14] WANG C Y, WANG Y, ZHANG J, et al.Optimization for the extraction of polysaccharides from Gentiana scabra Bunge and their antioxidant in vitro and anti-tumor activity in vivo[J].Journal of the Institute of Chemical Engineers,2014,45(4):1126-1132.
[15] KHAN A A, GANI A, MASOODI F A, et al.Structural, thermal,functional,antioxidant&antimicrobial properties of β-D-glucan extracted from baker's yeast(Saccharomyces cereviseae)-Effect of γ-irradiation[J].Carbohydrate Polymers,2016,140:442-450.
[16] MENG W H, SUN H N, MU T H, et al.Extraction, purification,chemical characterization and antioxidant properties in vitro of polyphenols from the brown macroalga Ascophyllum nodosum[J].Algal Research,2023,70:102989.
[17] ZHAN Q P,CHEN Y,GUO Y F,et al.Effects of selenylation modification on the antioxidative and immunoregulatory activities of polysaccharides from the pulp of Rose laevigata Michx fruit[J].International Journal of Biological Macromolecules, 2022, 206: 242-254.
[18] CHUN S, GOPAL J, MUTHU M.Antioxidant activity of mushroom extracts/polysaccharides-their antiviral properties and plausible AntiCOVID-19 properties[J].Antioxidants,2021,10(12):1899.
[19] 莫翠园,盛丽,刘若凡,等.虎奶菇多糖提取工艺优化、结构鉴定及抗氧化活性研究[J].食品科技,2022,47(9):156-163.MO Cuiyuan, SHENG Li, LIU Ruofan, et al.Extraction process optimization, structure identification and antioxidant activity of Pleurotus tuber-regium polysaccharide[J].Food Science and Technology,2022,47(9):156-163.
[20] 周路坦,温君,李盈盈,等.超声辅助提取箬竹叶多糖工艺及抗氧化活性研究[J].中国食品添加剂,2022,33(11):69-76.ZHOU Lutan,WEN Jun,LI Yingying,et al.Response surface methodology for optimization of ultrasonic-assisted extraction of polysaccharide from Indocalamus leaves and its antioxidation[J].China Food Additives,2022,33(11):69-76.
[21] 王振伟.响应面法优化桑椹多糖提取工艺及其抗氧化活性研究[J].饲料研究,2022,45(21):87-92.WANG Zhenwei.Optimization of extraction technology and antioxidant activity of Fructus Mori polysaccharide by response surface method[J].Feed Research,2022,45(21):87-92.
[22] 吴欣恬,阿吉尔古丽·麦麦提,高哈尔·巴克别尔,等.响应面法优化阿里红总三萜酸提取工艺及抗氧化活性研究[J].化学与生物工程,2023,40(1):30-36.WU Xintian, Aguiguli Maimeti, Gawhar Bacbel, et al.Optimization in extraction process and antioxidant activity of total triterpenoid acids from Fomes officinalis Ames by response surface methodology[J].Chemistry&Bioengineering,2023,40(1):30-36.
[23] 袁聪.青稞β-葡聚糖与益生菌共微胶囊化及其在巧克力中的应用研究[D].南昌:南昌大学,2022.YUAN Cong.Study on co-microencapsulation of highland barley βglucan and probiotics and its application in chocolate[D].Nanchang:Nanchang University,2022.
[24] 何源,王露露,张晶.3 种鹿源鹿茸多糖含量、红外谱图、抗氧化活性比较[J].中成药,2022,44(3):1028-1031.HE Yuan, WANG Lulu, ZHANG Jing.Comparison of polysaccharide content, infrared spectrum and antioxidant activity of three Deer antler species[J].Chinese Traditional Patent Medicine, 2022,44(3):1028-1031.
[25] DEVI M, KUMAR P, SINGH R, et al.Design, synthesis, spectroscopic characterization, single crystal X-ray analysis, in vitro αamylase inhibition assay,DPPH free radical evaluation and computational studies of naphtho [2, 3-d]imidazole-4, 9-dione appended 1, 2, 3-triazoles[J].European Journal of Medicinal Chemistry,2023,250:115230.
[26] 张军,聂卉,李寒露,等.三相萃取法提取啤酒废酵母β-葡聚糖及其抗氧化活性研究[J].中国酿造,2022,41(11):150-154.ZHANG Jun, NIE Hui, LI Hanlu, et al.Extraction β-glucan in waste beer yeast by three-phase extraction and its antioxidant activity[J].China Brewing,2022,41(11):150-154.