高脂高糖饮食是诱发高脂血症、肥胖问题愈发严重的主要原因之一。血脂异常是引发心血管疾病、动脉粥样硬化、脂肪肝、冠心病等疾病的重要因素[1]。如何有效、可持续地降低高脂血症发病率是目前大健康领域研究的重要内容。
茶叶及其提取物具有降血脂、减肥等功效，这主要归功于茶叶中存在的茶多酚、茶多糖及茶色素等几大类物质[2-5]，它们可以促进脂肪细胞分解、增加能量消耗以及调节脂质代谢，从而达到降低血脂水平和抑制体质量增加的作用[6-9]。黑茶属于微生物发酵茶类，其化学成分组成复杂。云南普洱茶、安化黑茶、茯砖茶对肥胖、高血脂等疾病具有良好的缓解作用[10-12]。六堡茶属于后发酵黑茶类，主产地在广西梧州，是中国国家地理标志产品，对其主要化学成分及降脂、减肥相关功效的相关研究较多[13-15]。赵宝权等[16]报道六堡茶调节血脂水平功效显著优于黑茶茶粉及普洱（熟茶）茶粉；吴朝比[17]发现黑茶中六堡茶的茶多酚含量最高，且高剂量组六堡茶能有效抑制高脂饮食引起的大鼠体质量增加，具有较好的减肥作用；吴文亮等[18]研究发现陈化15 年的六堡茶能有效改善高脂血症小鼠的有关生理指标；李祎等[19]研究六堡茶茶多糖对肠道的调节作用，证实了茶多糖具有调节血脂的作用。不同等级六堡茶的主要化学成分种类、含量差异及区分陈化3、5、10 年六堡茶的降脂减肥作用研究鲜见报道，因此，本文对比不同等级（特级、一级、二级）、不同陈化年份（3、5、10 年）六堡茶的主要化学成分种类、含量，基于高脂血症小鼠模型评价不同陈化年份六堡茶降脂减肥作用，以期促进六堡茶产业的发展。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 材料与试剂
六堡茶：广西梧州中茶茶业有限公司（特级、一级、二级为陈化3 年；陈化3、5、10 年均为特级）；表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin gallate，EGCG）标准品、没食子儿茶素没食子酸酯（gallocatechin gallate，GCG）标准品、表儿茶素没食子酸酯（epicatechin gallate，ECG）标准品：上海源叶生物科技有限公司；没食子酸（gallic acid，GA）、咖啡碱（caffeine，CAF）：成都曼思特生物科技有限公司；总胆固醇（total cholesterol，TC）试剂盒、甘油三酯（triglyceride，TG）试剂盒、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDLC）试剂盒、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）试剂盒、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）试剂盒、丙二醛（malondialdehyde，MDA）试剂盒：南京建成生物工程研究所有限公司；血脂康胶囊：北京北大维信生物科技有限公司。
1.1.2 实验动物
无特定病原体（specific pathogen free，SPF）级健康雄性KM 小鼠[体质量（20±2）g，许可证编号：SCXK（湘）2019-0004]：湖南斯莱克景达实验动物有限公司。
1.1.3 动物饲料
基础饲料：广西中医药大学动物实验室；高脂饲料：南京市盛民科研动物养殖公司。
1.1.4 仪器与设备
高效液相色谱仪（e2695）：美国Waters 公司；旋转蒸发仪（N-1100）：上海爱郎仪器有限公司；微压煎药机（PYJ-20）：温州顶历医疗器械有限公司；高速冷冻离心机（Sorvall ST 16R）：德国Thermo Electron LED GmbH 公司；酶标仪（Multiskan skyhigh）：美国Thermo 公司；紫外-可见分光光度计（UV-1900 i）：日本岛津公司；电子分析天平（FA2104 B）：上海越平科学仪器（苏州）制造有限公司；手持式组织碾磨器（MY-20）：上海净信实业发展有限公司；DSH-50-I 型电子水分测定仪：上海越平科学仪器有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 六堡茶水提物的制备
称取一定量茶叶用茶包分装，沸水浸提3 次。前两次分别以茶水比1∶20（g/mL）加入沸水，保温浸泡40 min，每隔5 min 搅拌1 次，取滤液，第3 次以茶水比1∶10（g/mL）加入沸水，重复上述操作，合并滤液，然后蒸发浓缩滤液至原体积的1/4，将所得溶液进行喷雾干燥，收集粉末并密封包装，4 ℃条件下保存备用。
1.2.2 茶样主要成分测定
茶叶含水量采用电子水分测定仪测定；水浸出物含量参考GB/T 8305—2013《茶水浸出物测定》的方法测定；茶多酚含量采用没食子酸比色法进行测定[20]，标准曲线回归方程为y=-0.003 8+18.178 2x（R2=0.999 7）；游离氨基酸含量参考GB/T 8314—2013《茶游离氨基酸总量的测定》中的茚三酮比色法进行测定，标准曲线回归方程为y=-0.185+100.36x（R2=0.990 6）；总黄酮含量采用亚硝酸钠-硝酸铝比色法测定[21]，标准曲线回归方程为y=-56 048.79+7.015 33×106x（R2=0.999 2）；可溶性糖含量采用蒽酮-硫酸比色法测定[22]，标准曲线回归方程为y=0.018 27+7.350 61x（R2=0.994 7）；茶褐素含量采用系统比色法测定[23]；咖啡碱（CAF）和儿茶素（EGCG、GCG、ECG、GA）的含量采用高效液相色谱法测定，色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），色谱条件：甲醇（流动相A），0.1% 甲酸水溶液（流动相B），流速0.8 mL/min，柱温40 ℃，检测波长278 nm，进样量5 μL，流动相梯度洗脱条件：0～8 min（18% A+82% B），8～13 min（18%～30% A+82%～70% B），13～18 min（30%～40% A+70%～60% B），18～24 min（40%～50%A+60%～50%B），24～30 min（50%～80%A+50%～20%B）。表1 为建立各成分的标准曲线回归方程，图1 为各成分的高效液相色谱图。
表1 各成分的线性回归方程、相关系数和线性范围
Table 1 Linear regression equation，correlation coefficient，and linear range of each component
茶样特级、一级、二级、陈化3 年、陈化5 年、陈化10 年特级、一级、二级、陈化3 年、陈化5 年陈化10 年成分CAF GA EGCG ECG GCG GCG线性回归方程y=-3 915.628 03+2.225 44×107x y=24 433.952 48+1.613 45×107x y=-22 606.148 44+7.852 09×106x y=-2 168.241 94+1.016 91×107x y=-12 263.603 66+8.083 32×106x y=-8 537.103 09+8.409 22×106x相关系数R2 0.999 58 0.999 03 0.999 04 0.999 73 0.999 56 0.999 71线性范围/（mg/mL）0.010～0.200 0.005～0.060 0.002 5～0.050 0.001～0.020 0.003～0.010 0.004～0.020
图1 不同等级和陈化年份六堡茶主要化学成分高效液相色谱
Fig.1 High performance liquid chromatograms of main chemical components in Liubao tea of different grades and aging years
1.2.3 动物实验
1）给样剂量设定：茶叶人体推荐量为成人（60 kg）每日饮用干茶10 g [即166.7 mg/（kg·d）]，小鼠茶叶喂养剂量的10 倍与成人等效[18]。由于实验样品为茶叶水提物，因此，每只小鼠每日给予剂量[mg/（kg·d）]为166.7×10×得率；阳性药人体（60 kg）推荐剂量为10 mg/（kg·d），小鼠喂养剂量为成人剂量的9.1 倍[即91 mg/（kg·d）][24]，每只小鼠每天灌胃0.2 mL/10 g[25]。
2）实验动物分组：将小鼠适应性喂养3 d[（22±3）℃，12 h/12 h 光暗循环]，随机分为两组，正常组（10 只）和高脂血症模型组（50 只）；正常组给予基础饲料与纯净水，高脂血症模型组给予高脂饲料与纯净水，每6 d 记录小鼠体质量，饲养30 d 建立高脂血症小鼠模型。
3）具体步骤：经30 d 喂养后，将诱导成功的高脂血症小鼠随机分为5 组，分别为模型对照组、阳性对照组、六堡茶组（陈化3、5、10 年组），每组10 只。除正常组外，其余各组均给予高脂饲料与纯净水；阳性对照组灌胃相应剂量的血脂康，正常组与模型对照组灌胃生理盐水，六堡茶组给予相应换算好的茶剂量，每6 d 记录小鼠体质量，连续24 d 后，禁食（不禁水）24 h，处死，收集各小鼠血液、肝脏。
1.2.4 小鼠血清及肝脏的采集及测定
1）血清采集：对小鼠进行摘眼球采血，血浆经4 ℃、3 000 r/min 离心20 min，分离血清，待测各项指标。
2）肝脏采集：采取颈椎脱位法处理小鼠，迅速摘取肝脏，用生理盐水处理后称质量，准确记录小鼠肝脏质量并观察其变化情况，切取同一部位，置于4%多聚甲醛通用型组织固定液中固定，制备切片，苏木精和伊红（hematoxylin and eosin，HE）染色后在显微镜下拍照观察；称取肝组织，按照料液比1∶9（g/mL）加入生理盐水，制备10%匀浆，4 ℃、3 000 r/min 离心10 min，取上清液待测相关指标。其余部分置于-80 ℃冰箱保存。
3）血清与肝脏匀浆液相关指标：血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C 指标，肝脏匀浆中MDA 含量和SOD 活力，均按试剂盒说明书进行测定。
肝体比（R，%）按以下公式计算。
式中：m 为肝脏质量，g；M 为小鼠体质量，g。
1.3 数据处理
实验数据采用Excel 2010 软件进行方差分析，结果以平均值±标准差表示；采用SPSS 26 和T 检验进行组间比较，以P＜0.05 表示具有显著性差异，P＜0.01 表示具有极显著性差异，P＞0.05 表示没有统计学意义或差异不显著。
2 结果与分析
2.1 不同等级及不同陈化年份六堡茶主要化学成分及含量分析
为明确不同等级和不同陈化年份（3、5、10 年）六堡茶主要化学成分之间的差异，选取3 个等级和3 个陈化年份的六堡茶茶样进行分析。不同等级六堡茶主要化学成分及含量结果如表2 所示。
表2 不同等级六堡茶主要化学成分含量（n=3）
Table 2 Content of main chemical components in Liubao tea of different grades（n=3）
儿茶素含量/（mg/g）茶样特级一级二级含水量/%10.35±0.48 10.11±0.35 9.54±0.19水浸出物含量/%28.21±0.62 29.36±4.48 33.42±0.93茶多酚含量/%7.51±2.43 7.42±0.08 6.48±4.13可溶性糖含量/%2.98±0.17 1.98±0.28 2.67±0.34游离氨基酸含量/%0.75±0.26 0.80±0.32 0.69±0.26总黄酮含量/%12.07±2.49 11.10±0.65 10.84±1.85茶褐素含量/%11.28±0.73 11.27±1.32 10.90±1.11 CAF含量/（mg/g）23.58±0.40 23.30±1.50 22.97±0.72 EGCG 2.52±0.02 2.47±0.41 2.13±0.27 GCG 2.44±0.35 1.74±0.46 1.77±0.19 ECG 1.68±0.20 1.07±0.48 1.49±0.28 GA 3.46±0.39 2.48±0.35 2.47±0.14儿茶素总含量/（mg/g）10.10±0.24 7.76±0.42 7.86±0.22
由表2 可知，不同等级茶样主要成分种类相同，含量存在着一定的区别；茶样含水量随等级升高稍有增多，含量范围为9.54%～10.35%；水浸出物含量最高的是二级茶样（33.42%），最低是特级茶样（28.21%）；茶样的茶多酚、总黄酮、茶褐素、咖啡碱（CAF）含量大小排序为特级＞一级＞二级，这与文献[26]报道的黑茶主要化学成分含量规律相似。可溶性糖含量以特级茶样最高（2.98%），二级茶样含量次之（2.67%），一级茶样最低（1.98%）；游离氨基酸含量随等级降低先增加后减少；儿茶素总含量最高为特级茶样，一级和二级茶样儿茶素总含量接近，其中EGCG 和GA 含量随着等级降低呈减少的趋势，而GCG 和ECG 含量则先减少后增加。
不同陈化年份六堡茶主要化学成分及含量结果如表3 所示。
表3 不同陈化年份六堡茶主要化学成分及含量（n=3）
Table 3 Content of main chemical components in Liubao tea aged for different years（n=3）
茶样儿茶素含量/（mg/g）陈化3 年陈化5 年陈化10 年含水量/%10.35±0.48 9.70±0.16 9.53±0.14水浸出物含量/%28.21±0.62 30.30±2.74 31.68±0.42茶多酚含量/%7.51±2.43 6.38±0.97 5.74±3.99可溶性糖含量/%2.98±0.17 3.95±0.12 3.87±0.13游离氨基酸含量/%0.75±0.26 0.64±0.07 0.61±0.19总黄酮含量/%12.07±2.49 11.42±3.10 10.27±2.12茶褐素含量/%11.28±0.73 14.13±0.66 10.83±0.71 CAF含量/（mg/g）23.58±0.40 22.78±0.59 22.33±1.29 EGCG 2.52±0.02 1.21±0.02 6.20±1.47 GCG 2.44±0.35 1.25±0.49 8.10±1.46 ECG 1.68±0.20 0.70±0.38 3.87±1.18 GA 3.46±0.39 3.33±0.96 3.11±1.00儿茶素总含量/（mg/g）10.10±0.24 6.49±0.46 21.28±1.28
由表3 可知，3 个不同陈化年份六堡茶茶样的含水量、茶多酚、游离氨基酸、总黄酮和咖啡碱（CAF）含量随着陈化年份的延长呈减少趋势；水浸出物含量为陈化10 年茶样最高（31.68%），陈化3 年茶样最低（28.21%）；可溶性糖含量随陈化年份延长呈现先增加后减少趋势；陈化5 年茶样的茶褐素含量达到最高（14.13%），与文献[18]报道的陈化5 年六堡茶茶褐素含量达到最高值相符；儿茶素总含量以陈化10 年的茶样含量最高（21.28 mg/g），陈化3 年茶样次之（10.10 mg/g），陈化5 年的茶样最低（6.49 mg/g），其中GA 的含量随陈化年份的延长呈现递减趋势，EGCG、GCG、ECG 含量最高的是陈化10 年的茶样，最低是陈化5 年的茶样。鉴于不同陈化年份茶样茶多酚、儿茶素、可溶性糖、茶褐素等含量差异较大，故选择不同陈化年份（3、5、10 年）的六堡茶茶样用于研究降脂减肥功效。
2.2 六堡茶对高脂血症小鼠的降脂减肥效果对比分析
2.2.1 高脂饲料诱导高脂血症小鼠模型的建立
图2 为造模期小鼠体质量的变化，图3 为造模后小鼠血清TC、TG 指标比较。
图2 造模期小鼠体质量的变化
Fig.2 Changes in body mass of mice during the modeling period
*表示与正常组相比差异显著，P＜0.05；**表示与正常组相比差异极显著，P＜0.01。
图3 造模后小鼠血清TC、TG 指标比较
Fig.3 Comparison on the serum levels of total cholesterol（TC）and triglyceride（TG）in mice after modeling
*表示与正常组相比差异显著，P＜0.05；**表示与正常组相比差异极显著，P＜0.01。
由图2、图3 可知，高脂饲料诱导高脂血症小鼠模型前，正常组小鼠初体质量与高脂血症模型组小鼠初体质量间无显著差异（P＞0.05）；高脂血症模型组小鼠经过30 d 高脂饲料喂养后，小鼠终体质量比正常组高7.3% 以上，且与正常组小鼠相比具有显著性差异（P＜0.05）；高脂血症模型组小鼠血清TC 及TG 含量升高明显，其中TC 含量是正常组1.4 倍，且TC、TG 含量与文献[27]的结果接近。结果表明高脂饮食诱导的高脂血症小鼠模型成功构建。
2.2.2 六堡茶对高脂血症小鼠体质量的影响
给予高脂血症小鼠不同陈化年份六堡茶水提物干预24 d，随着时间延长，各组间小鼠体质量变化见图4。
图4 给予六堡茶水提物期间小鼠体质量的变化
Fig.4 Changes in body mass of mice administrated with the aqueous extract of Liubao tea for different time periods
由图4 可知，正常组小鼠体质量保持在一个相对平稳的水平，模型对照组小鼠体质量缓慢增长，六堡茶组及阳性对照组小鼠体质量出现缓慢下降的趋势。
六堡茶对小鼠初体质量和终体质量的影响见表4。
表4 六堡茶对小鼠初体质量和终体质量的影响
Table 4 Effects of Liubao tea on the initial and final body mass of mice
注：*表示与正常组相比差异显著，P＜0.05；**表示与正常组相比差异极显著，P＜0.01；#表示与模型对照组相比差异显著，P＜0.05。
组别降脂结束动物只数10降脂初始动物只数10 10 10 10 10 10终体质量/g 39.93±3.83 43.70±3.42*40.60±2.05*#41.29±3.75*#40.80±2.74*#40.33±2.60*#正常组模型对照组阳性对照组陈化3 年组陈化5 年组陈化10 年组初体质量/g 39.65±3.46 42.16±3.25*42.58±3.37*42.88±2.23**42.58±2.71**42.44±2.93**8 8 10 10 10
由表4 可知，降脂实验初始，与正常组小鼠体质量对比，模型对照组、阳性对照组及六堡茶组小鼠体质量增加显著（P＜0.05，P＜0.01），此时模型对照组、阳性对照组及六堡茶组之间小鼠初体质量无显著性差异（P＞0.05）；降脂实验结束时，与正常组小鼠体质量对比，模型对照组小鼠体质量显著增加（P＜0.05）；与模型对照组相比，阳性对照组及六堡茶组小鼠体质量均显著降低（P＜0.05），且随着六堡茶陈化年份的延长，小鼠终体质量呈逐渐降低的趋势，表明其与六堡茶陈化年份呈一定效应关系。综上，六堡茶水提物对高脂血症小鼠体质量增加有一定程度的抑制作用，且随着六堡茶陈化年份的延长，其抑制作用逐渐增强。
2.2.3 六堡茶对小鼠血清指标干预的作用
表5 为各组小鼠血脂4 项指标含量比较。
表5 各组小鼠血脂4 项指标含量比较
Table 5 Comparison on four indicators of blood lipids among different groups of mice
注：*表示与正常组相比差异显著，P＜0.05；**表示与正常组相比差异极显著，P＜0.01；#表示与模型对照组相比差异显著，P＜0.05；##表示与模型对照组相比差异极显著，P＜0.01。
HDL-C 含量/（mmol/L）1.74±0.21 1.71±0.19*2.24±0.18*#2.19±0.25*#2.08±0.24*#2.07±0.26*#组别正常组模型对照组阳性对照组陈化3 年组陈化5 年组陈化10 年组动物只数10 8 8 10 10 10 TC 含量/（mmol/L）1.22±0.21 1.83±0.22**1.72±0.17**#1.73±0.14**#1.66±0.14**#1.65±0.21**#TG 含量/（mmol/L）1.29±0.16 1.74±0.19*1.06±0.18*##1.59±0.13*#1.20±0.12*#1.17±0.23*#LDL-C 含量/（mmol/L）0.70±0.19 1.09±0.24*1.07±0.19*#1.00±0.23*#0.98±0.21*#0.87±0.21*#
由表5 可知，与正常组相比，模型对照组小鼠血清的TC、TG、LDL-C 含量显著高于正常组，且HDL-C 含量显著低于正常组（P＜0.05、P＜0.01），表明高脂饮食使小鼠维持着高脂血症症状。与模型对照组相比，阳性对照组和六堡茶组小鼠的血清TC、TG、LDL-C 含量均显著降低（P＜0.05、P＜0.01），这3 个指标含量随六堡茶陈化年份延长呈现递减趋势；阳性对照组和六堡茶组小鼠血清HDL-C 含量显著增高（P＜0.05）。
2.2.4 六堡茶对小鼠肝脏指数和肝脏抗氧化指标的影响
各组小鼠肝脏指数和肝脏抗氧化指标如表6 所示。
表6 各组小鼠肝脏指数和肝脏抗氧化指标的对比
Table 6 Comparison on liver index and liver antioxidant indicators among different groups of mice
注：*表示与正常组相比差异显著，P＜0.05；**表示与正常组相比差异极显著，P＜0.01；#表示与模型对照组相比差异显著，P＜0.05；##表示与模型对照组相比差异极显著，P＜0.01。
组别正常组模型对照组阳性对照组陈化3 年组陈化5 年组陈化10 年组动物只数10 8 8 10 10 10肝质量/g 1.29±0.16 1.50±0.04**1.36±0.13*#1.38±0.23*#1.40±0.34*#1.37±0.15*##肝体比/%3.23±0.09 3.43±0.37*3.35±0.17*#3.34±0.43*3.34±0.59*3.39±0.39*#SOD 活力/（U/mg）45.70±4.04 42.71±3.97*46.19±4.58*#46.09±3.22*#46.64±4.56*#46.91±3.86*#MDA 含量/（nmol/mg）1.91±0.97 2.17±0.50*1.69±0.92*#1.45±0.57*#1.62±0.43*#1.53±0.33**#
由表6 可知，与正常组小鼠相比，高脂血症模型组小鼠的肝质量、肝体比显著增加；与模型对照组相比，阳性对照组及六堡茶组小鼠的肝质量显著降低，而肝体比只有阳性对照组和陈化10 年组存在显著性差异（P＜0.05），陈化3、5 年组均未显著降低（P＞0.05），说明陈化3、5、10 年的六堡茶水提物能有效控制小鼠肝质量增加，陈化10 年六堡茶水提物能有效抑制肝体比增大。与正常组小鼠肝脏SOD 活力指标相比，模型对照组的SOD 活力显著降低（P＜0.05），表明给予高脂饮食的小鼠肝脏的氧化应激状态较强[28]，与模型对照组相比，给予陈化3、5、10 年六堡茶水提物干预后，小鼠的SOD 活力均显著增加（P＜0.05），与郭婉琴等[29]结果一致；与正常组小鼠肝脏匀浆丙二醛（MDA）含量相比，模型对照组小鼠MDA 含量显著增加（P＜0.05），与模型对照组相比，给予陈化3、5、10 年六堡茶水提物干预后，MDA 含量显著降低，说明陈化3、5、10 年六堡茶均对小鼠肝脏匀浆组织的氧化损伤和氧化应激状态有改善功效。
2.2.5 六堡茶对小鼠肝脏组织形态的影响
小鼠肝脏表观如图5 所示。
图5 小鼠肝脏
Fig.5 Livers of mice
A.正常组；B.模型对照组；C.阳性对照组；D.陈化3 年组；E.陈化5 年组；F.陈化10 年组。
由图5 可知，正常组小鼠肝脏颜色呈现暗红色，色泽均匀，光滑且质地坚韧；模型对照组小鼠肝脏体积比正常组大，呈现土黄色，油腻且质地柔软；而阳性对照组和六堡茶组小鼠肝脏色泽偏暗红色，油腻度减轻，质地坚韧。
小鼠肝脏组织病理切片HE 染色结果显示如图6所示。
图6 小鼠肝脏组织病理切片（400×）
Fig.6 Pathological tissue sections of mouse liver（400×）
A.正常组；B.模型对照组；C.阳性对照组；D.陈化3 年组；E.陈化5 年组；F.陈化10 年组。
由图6 可知，正常组小鼠肝脏组织细胞大小较一致，细胞核清晰可见，胞浆较均匀，肝小叶轮廓及肝窦清晰，肝索排列整齐，提示肝组织结构未受损伤；模型对照组小鼠肝小叶界限较不清晰，细胞内有大量脂滴空泡，肝窦缩小，肝索排列无序，提示发生脂质变性；与模型对照组相比，阳性对照组和六堡茶组小鼠肝脏状态得到一定程度的改善，肝小叶轮廓及肝窦清晰，脂滴明显减少，肝细胞间界限清晰，结果表明六堡茶对高脂血症肝脏细胞损伤有一定改善作用。
3 讨论与结论
吴文亮等[18]研究表明六堡茶随着陈化时间延长，主要化学成分含量减少。本文对比研究分析不同等级、不同陈化年份六堡茶的主要化学成分种类含量差异，研究结果显示，不同等级、不同陈化年份六堡茶水提物主要化学成分种类相似，含量存在差异。不同等级六堡茶茶多酚、总黄酮、茶褐素、咖啡碱含量顺序依次为特级茶样＞一级茶样＞二级茶样。可溶性糖、儿茶素（EGCG、GCG、ECG 和GA）以特级含量最高，而游离氨基酸总量以一级茶含量较高；不同陈化年份（3、5、10 年）茶样的含水量、茶多酚、游离氨基酸、总黄酮和咖啡碱的含量随着陈化年份的延长呈减少趋势，茶褐素含量以陈化5 年茶样达到最高，陈化10 年茶样较低，儿茶素中EGCG、GCG、ECG 含量最高为陈化10 年茶样。
六堡茶具有显著的降脂减肥功效，已有研究提出茶多酚、茶褐素、总黄酮、儿茶素等成分是调节脂质代谢的主要物质基础[3，30-32]。以高脂饲料饮食诱导建立的高脂血症小鼠模型TC、TG 含量和终体质量均显著高于正常组，表明造模成功且模型稳定。鉴于不同陈化年份的六堡茶主要物质成分含量存在差异，给予六堡茶水提物干预高脂血症小鼠模型，研究结果表明，3 组不同陈化年份的六堡茶水提物均能有效改善高脂血症小鼠的血脂及肝脏指标。与模型对照组相比，陈化10 年组对小鼠体质量、血清指标及肝脏指数干预作用尤其显著（P＜0.05），说明六堡茶的降脂减肥功效与陈化时间存在依赖关系。小鼠肝脏组织细胞切片也显示肝脏损伤度有所改善，提示陈化10 年六堡茶在正常剂量下能有效改善高脂血症小鼠的血脂及肝损伤。吕海鹏[33]发现普洱茶中某些未知的高分子聚合物可能是普洱茶减肥降脂功能成分，因此推测陈化10 年六堡茶降脂减肥作用比陈化3、5 年的结果更佳与其儿茶素（EGCG、GCG、ECG）含量最高、茶褐素及可溶性多糖含量较高直接有关。
综上所述，不同陈化年份六堡茶中的儿茶素、茶褐素及可溶性多糖含量差异导致其对高脂血症小鼠的降血脂、减肥功效不同，有关陈年六堡茶在降血脂功效方面的机制有待进一步研究。
[1] 罗利俊,龚雪琴,陈玲,等.武汉市社区居民脑卒中危险因素分布及知晓情况的调查分析[J].中国康复,2018,33(1):81-84.LUO Lijun, GONG Xueqin, CHEN Ling, et al.Investigation on the distribution of stroke risk factors and awareness of stroke-related knowledge among community residents in Wuhan[J].Chinese Journal of Rehabilitation,2018,33(1):81-84.
[2] 彭静静.六堡茶的降血脂功能性研究[D].南宁:广西大学,2012.PENG Jingjing.Study on the blood lipid lowering function of Liubao tea[D].Nanning:Guangxi University,2012.
[3] HUANG F J, ZHENG X J, MA X H, et al.Theabrownin from Puerh tea attenuates hypercholesterolemia via modulation of gut microbiota and bile acid metabolism[J].Nature Communications,2019,10:4971.
[4] LI H Y,HUANG S Y,ZHOU D D,et al.Theabrownin inhibits obesity and non-alcoholic fatty liver disease in mice via serotonin-related signaling pathways and gut-liver axis[J].Journal of Advanced Research,2023,52:59-72.
[5] MAO Y,WEI B Y,TENG J W,et al.Polysaccharides from Chinese Liupao dark tea and their protective effect against hyperlipidemia[J].International Journal of Food Science & Technology,2018,53(3):599-607.
[6] 李勤,熊立瑰,晏玲玲,等.安化黑茶的降脂减肥功效及作用机理[J].中国茶叶,2023,45(1):6-11,17.LI Qin, XIONG Ligui, YAN Lingling, et al.Effect and mechanism of Anhua dark tea on reducing blood lipid and weight[J].China Tea,2023,45(1):6-11,17.
[7] LIU C, GUO Y T, SUN L L, et al.Six types of tea reduce high-fatdiet-induced fat accumulation in mice by increasing lipid metabolism and suppressing inflammation[J].Food & Function, 2019, 10(4):2061-2074.
[8] QIAN Y C, WANG X, REN J, et al.Different effects of two dietary levels of tea polyphenols on the lipid deposition,immunity and antioxidant capacity of juvenile GIFT tilapia (Oreochromis niloticus)fed a high-fat diet[J].Aquaculture,2021,542:736896.
[9] WU W L, HU Y, ZHANG S G, et al.Untargeted metabolomic and lipid metabolism-related gene expression analyses of the effects and mechanism of aged Liupao tea treatment in HFD-induced obese mice[J].RSC Advances,2021,11(38):23791-23800.
[10] 孙世利,刘雅琼,刘瑾,等.不同年份普洱茶体外降糖降脂作用及其物质基础[J].食品研究与开发,2018,39(9):152-158.SUN Shili,LIU Yaqiong,LIU Jin,et al.Study on the effects of Pu'er tea stored at different years in relieving diabetes mellitus and hyperlipidemia in vitro and its material basis[J].Food Research and Development,2018,39(9):152-158.
[11] DU Y, YANG W R, YANG C C, et al.A comprehensive review on microbiome, aromas and flavors, chemical composition, nutrition and future prospects of Fuzhuan brick tea[J].Trends in Food Science&Technology,2022,119:452-466.
[12] XIAO Y, HUANG Y N, LONG F W, et al.Insight into structural characteristics of theabrownin from Pingwu Fuzhuan brick tea and its hypolipidemic activity based on the in vivo zebrafish and in vitro lipid digestion and absorption models[J].Food Chemistry, 2023,404:134382.
[13] 马婉君,马士成,刘春梅,等.六堡茶的化学成分及生物活性研究进展[J].茶叶科学,2020,40(3):289-304.MA Wanjun, MA Shicheng, LIU Chunmei, et al.Research progress on chemical composition and biological activity of Liupao tea[J].Journal of Tea Science,2020,40(3):289-304.
[14] WU Y,SUN H L,YI R K,et al.Anti-obesity effect of Liupao tea extract by modulating lipid metabolism and oxidative stress in high-fatdiet-induced obese mice[J].Journal of Food Science, 2021, 86(1):215-227.
[15] WU Z M,YU W X,NI W J,et al.Improvement of obesity by Liupao tea is through the IRS-1/PI3K/AKT/GLUT4 signaling pathway according to network pharmacology and experimental verification[J].Phytomedicine: International Journal of Phytotherapy and Phytopharmacology,2023,110:154633.
[16] 赵宝权,邵宛芳,刘家奇,等.六堡茶、黑茶茶粉和普洱(熟茶)茶粉对Wistar 大鼠调节血脂及抗氧化功能的比较研究[J].云南农业大学学报(自然科学),2013,28(2):236-241.ZHAO Baoquan, SHAO Wanfang, LIU Jiaqi, et al.Comparative study on effect of fermented Pu-erh tea powder, dark tea powder and liupu tea on regulation of blood lipid and antioxidant in hyperlipidemia model rats[J].Journal of Yunnan Agricultural University(Natural Science),2013,28(2):236-241.
[17] 吴朝比.黑茶降血脂功效评价及其对模型大鼠蛋白质差异表达的影响[D].长沙:湖南农业大学,2012.WU Chaobi.Studies on hypolipidemic effect of dark tea extracts on experimental hyperlipemia rats and their effect on protein expression[D].Changsha:Hunan Agricultural University,2012.
[18] 吴文亮,刘仲华,林勇,等.陈年六堡茶对高脂血症小鼠的调脂护肝作用研究[J].茶叶科学,2018,38(4):430-438.WU Wenliang, LIU Zhonghua, LIN Yong, et al.Alleviative effects of aged Liupao tea on lipid metabolism and liver injury in hyperlipidemic mice[J].Journal of Tea Science,2018,38(4):430-438.
[19] 李祎,毛彦,黄丽,等.六堡茶多糖对高脂血症大鼠结肠微生态的影响[J].大众科技,2023,25(2):99-104.LI Yi, MAO Yan, HUANG Li, et al.Effect of Liupao tea polysaccharide on colonic microecology in hyperlipidemia rats[J].Popular Science&Technology,2023,25(2):99-104.
[20] 李欣燃,陈玉萍,石云丽,等.尼泊尔酸模根部多酚提取工艺优化及其抗氧化活性研究[J].中国饲料,2022(1):19-22,28.LI Xinran, CHEN Yuping, SHI Yunli, et al.Optimization of extraction process of total polyphenols from Rumex nepalensis Spreng and its antioxidant activity[J].China Feed,2022(1):19-22,28.
[21] 刘文强,董壮壮,孙庆,等.桑叶茶中多酚、黄酮含量与抗氧化作用的相关性研究[J].食品科技,2023,9(2):239-245.LIU Wenqiang,DONG Zhuangzhuang,SUN Qing,et al.Correlation between the contents of active substances in mulberry leaf tea and their antioxidant activities[J].Food Science and Technology, 2023,9(2):239-245.
[22] 杨勤,谷文超,周浓,等.苯酚-硫酸法与蒽酮-硫酸法测定地参多糖的比较研究[J].食品科技,2020,45(1):343-350.YANG Qin, GU Wenchao, ZHOU Nong, et al.Comparison of phenol-sulfuric acid and anthrone-sulfuric methods for determination of polysaccharide in Lycopus lucidus tilrcz.var.hirtus regel[J].Food Science and Technology,2020,45(1):343-350.
[23] 黄意欢.茶学实验技术[M].北京:中国农业出版社,1997.HUANG Yihuan.Experimental techniques in tea science[M].Beijing:China Agriculture Press,1997.
[24] 赵伟,孙国志.不同种实验动物间用药量换算[J].畜牧兽医科技信息,2010(5):52-53.ZHAO Wei, SUN Guozhi.Conversion of drug dosage between different experimental animals[J].Chinese Journal of Animal Husbandry and Veterinary Medicine,2010(5):52-53.
[25] 魏伟,吴希美,李元建.药理实验方法学[M].4 版.北京:人民卫生出版社,2010.WEI Wei, WU Ximei, LI Yuanjian.Experimental methodology of pharmacology[M].4th ed.Beijing: People's Medical Publishing House,2010.
[26] 赵熙,黄浩,秦国杰,等.湖南不同等级黑毛茶品质分析[J].茶叶通讯,2018,45(3):27-31.ZHAO Xi, HUANG Hao, QIN Guojie, et al.Quality analysis of different grades of dark tea Maocha in Hunan[J].Journal of Tea Communication,2018,45(3):27-31.
[27] 潘昱辰,吕有为,孙铭键,等.马齿苋水提物对高脂血症小鼠血脂的影响[J].北华大学学报(自然科学版),2023,9(3):315-319.PAN Yuchen, LÜ Youwei, SUN Mingjian, et al.Effects of Portulaca oleracea L.aqueous water extract on blood lipid in hyperlipidemia mice[J].Journal of Beihua University (Natural Science),2023,9(3):315-319.
[28] 吴娜,蔡光明,何群.氧化应激与肝脏损伤[J].世界华人消化杂志,2008,16(29):3310-3315.WU Na,CAI Guangming,HE Qun.Oxidative stress and hepatic injury[J].World Chinese Journal of Digestology, 2008, 16(29): 3310-3315.
[29] 郭婉琴, 王语晴, 任宇婷, 等.注射用红花黄色素对高脂血症模型小鼠血脂水平影响[J].辽宁中医药大学学报, 2023, 25(1):9-14.GUO Wanqin, WANG Yuqing, REN Yuting, et al.Effects of safflower yellow for injection on blood lipid levels in hyperlipidemia model mice[J].Journal of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,2023,25(1):9-14.
[30] 陈智雄,齐桂年,邹瑶,等.黑茶调节脂质代谢的物质基础及机理研究进展[J].茶叶科学,2013,33(3):242-252.CHEN Zhixiong,QI Guinian,ZOU Yao,et al.Research advance on mechanism of regulating lipid metabolism by active ingredients of dark tea[J].Journal of Tea Science,2013,33(3):242-252.
[31] MA H,HU Y Z,ZHANG B W,et al.Tea polyphenol-gut microbiota interactions:Hints on improving the metabolic syndrome in a multielement and multi-target manner[J].Food Science and Human Wellness,2022,11(1):11-21.
[32] YUE S J, ZHAO D, PENG C X, et al.Effects of theabrownin on serum metabolites and gut microbiome in rats with a high-sugar diet[J].Food&Function,2019,10(11):7063-7080.
[33] 吕海鹏.普洱茶的化学成分分析及其抗氧化活性研究[D].北京:中国农业科学院,2005.LÜ Haipeng.Analysis on the chemical compounds from Pu-er tea and their antioxidant activity[D].Beijing:Chinese Academy of Agricultural Sciences,2005.