石榴是我国亚热带和温带地区广泛种植的水果，由于其味道香甜可口，已经成大众喜爱的水果。目前石榴主要以鲜食和榨汁为主，因此每年会产生大量的石榴皮副产物。研究发现，石榴皮中富含大量的功能活性成分，如黄酮、多糖、生物碱和有机酸等[1]。已有研究表明石榴皮具有抗肿瘤、免疫调节、驱虫、止泻等功效，但是每年只有少部分石榴皮被进一步开发[2-3]。石榴皮多糖作为石榴皮中的重要活性成分，目前已经被证实具有抗氧化、降血糖等多种生理功能[4]。但是目前关于石榴皮多糖提取工艺优化的研究较少，限制了石榴皮多糖的进一步开发应用。
石榴皮多糖的提取方法目前主要有热水浸提法[5]、超声波辅助提取法[6]、内部沸腾法[7]、微波辅助提取法等[8]。相对于传统热水浸提法存在耗时过长的缺点，超声和微波辅助提取方法虽然在提取效率上具有优势，但也存在一些缺点如导致多糖降解[9]。动态高压微射流作为一种超微均质技术，可以通过瞬时高压产生强大的剪切力、撞击力以及空穴爆炸力破碎物料，对功能活性组分影响较小[10-11]。此外，动态高压微射流还具有降低物料粒径、提高溶剂渗透率、提高多糖得率等优点。目前，动态高压微射流辅助提取技术已被用于黑木耳、鱼鳞、牛蒡根等多糖的提取研究中[10，12-13]。然而，关于动态高压微射流辅助提取的石榴皮多糖研究鲜见。
本文以多糖得率为指标，采用响应面法优化动态高压微射流辅助提取石榴皮多糖的提取工艺，同时采用3 种体外抗氧化评价方法探究石榴皮多糖的抗氧化活性，以期为石榴皮多糖的开发和利用提供理论依据和技术参考。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
郑州河阴鲜石榴：市售。石榴皮置于鼓风干燥箱中经过50 ℃烘干后粉碎过60 目筛备用。硫酸亚铁、无水乙醇、丙酮：天津科密欧试剂有限公司；水杨酸、过氧化氢、过硫酸钾：国药集团化学试剂有限公司；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）：上海阿拉丁试剂有限公司；三羟甲基氨基甲烷[（hydroxymethyl）-aminomethane，Tris]、2，2′-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐[2，2′-azinobis-（3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate），ABTS]：北京索莱宝科技有限公司。所有试剂均为分析纯。
L-80-XP 型离心机：美国Beckman 公司；HH-42 水浴锅：常州国华电器有限公司；HZ-2014A 鼓风干燥箱：上海一恒仪器有限公司；UY120 型电子天平：北京赛多利斯天平有限公司；RE-52AA 型旋转蒸发器：上海亚荣生化仪器厂；SPCH-10 高压微射流均质机：英国Stansted Fluid Power 公司；Orion 3 STAR pH 计：美国Thermo 公司；722N 型可见分光光度计：上海菁华科技仪器有限公司。
1.2 试验方法
1.2.1 石榴皮多糖的提取
参考赵岩岩等[10]的方法并略作修改。称取20 g 石榴皮粉，按一定比例的料液比加入蒸馏水混合均匀，应用动态高压微射流均质机在不同微射流压力条件下处理3 次，收集样品备用。预处理后的样品分别在60 ℃条件下，经过不同提取时间后，离心（5 000×g、10 min）。收集上清液经50 ℃真空旋转蒸发浓缩为原体积的1/3后，4 ℃条件下无水乙醇沉淀12 h，离心（5 000×g、10 min）收集沉淀。分别用无水乙醇、丙酮洗涤2 次。样品经冷冻干燥后得到石榴皮粗多糖。
1.2.2 石榴皮多糖得率的测定
以葡萄糖为标准品，应用蒽酮-硫酸法比色法测定多糖含量[14]。以葡萄糖浓度（X）为横坐标，吸光度（Y）为纵坐标，绘制标准曲线得到回归方程（Y=11.302X+0.083 6，R2=0.998）。通过回归方程计算样品的多糖得率（D，%）。
D=A/B×100
式中：A 为提取所得多糖质量，g；B 为原料质量，g。
1.2.3 单因素试验
1.2.3.1 料液比对石榴皮多糖得率的影响
固定微射流压力为100 MPa，分别以1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50（g/mL）的料液比在提取温度60 ℃条件下提取2 h，离心（4 ℃、5 000×g、10 min）得上清液，按照1.2.2 方法计算多糖得率。
1.2.3.2 微射流压力对石榴皮多糖得率的影响
固定料液比1∶20（g/mL），分别经50、75、100、125 MPa 和150 MPa 的微射流压力处理后，在提取温度60 ℃条件下提取2 h，离心（4 ℃、5 000 ×g、10 min）得上清液，按照1.2.2 方法计算多糖得率。
1.2.3.3 提取时间对石榴皮多糖得率的影响
固定微射流压力为100 MPa，料液比1∶20（g/mL），在温度60 ℃条件下分别提取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h，离心（4 ℃、5 000×g、10 min）得上清液，按照1.2.2 方法计算多糖得率。
1.2.3.4 提取温度对石榴皮多糖得率的影响
固定微射流压力为100 MPa，料液比1∶20（g/mL），分别在提取温度50、60、70、80、90 ℃条件下提取2 h，离心（4 ℃、5 000×g、10 min）得上清液，按照1.2.2 方法计算多糖得率。
1.2.4 响应面试验设计
根据单因素试验结果，选取料液比、微射流压力以及提取时间3 个因素为自变量，以石榴皮多糖得率为评价指标设计Box-Behnken 响应面试验，优化动态高压微射流辅助提取石榴皮多糖工艺，试验因素水平见表1。
表1 响应面试验因素与水平
Table 1 Factors and levels in response surface design
因素水平-1 0 1 X1 料液比/（g/mL）1∶30 1∶40 1∶50 X2 微射流压力/MPa 75 100 125 X3 提取时间/h 2.0 2.5 3.0
1.2.5 石榴皮多糖抗氧化活性测定
1.2.5.1 DPPH·清除能力的测定
参考Gong 等[15]的方法并略作改动。在试管中分别加入不同浓度（0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL）的石榴皮多糖溶液2 mL 以及DPPH 溶液（0.16 mmol/L）2 mL，振荡摇匀后放置在25 ℃水浴锅内水浴30 min，在517 nm 处测定样品吸光度（Ai）。同时将上述2 mL样品用2 mL 蒸馏水替代测空白吸光度（A0），以2 mL蒸馏水和2 mL DPPH 溶液混匀测定其吸光度（Aj），其中A0、Ai 和Aj 中的每个样品分别做3 次平行试验。DPPH·清除率（X，%）按照下列公式计算并求平均值。
X=[A0-（Ai-Aj）]/A0×100
1.2.5.2 ·OH 清除能力的测定
参考Lu 等[16]的方法并略作修改。在试管中分别加入不同浓度（0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL）的石榴皮多糖溶液2 mL 以及2 mL 的硫酸亚铁溶液（6 mmol/L）、2 mL 水杨酸溶液（6 mmol/L）、2 mL 的过氧化氢溶液（6 mmol/L），振荡混匀后在37 ℃下水浴30 min，测定其在510 nm 处的样品吸光度（Ai）。同时将上述样品溶液用2 mL 蒸馏水替代，测定空白吸光度（A0），将2 mL 的过氧化氢用2 mL 蒸馏水替代，测定其在510 nm处的本底吸光度（Aj），其中A0、Ai 和Aj 的每个样品做3次平行试验。·OH 清除率（Y，%）按照下列公式计算并求平均值。
Y=[A0-（Ai-Aj）]/A0×100
1.2.5.3 ABTS+·清除能力的测定
参考Li 等[17]的方法并略作改进。将配制好的ABTS 溶液（7 mmol/L）和K2S2O8 溶液（2.45 mmol/L）同等体积混合，置于4 ℃避光保存15 h 得到ABTS 储备液。在使用前，将ABTS 储备液用磷酸盐缓冲液（10 mmol/L、pH7.4）稀释至734 nm 处吸光度为0.700±0.020，得到ABTS 测定液。在试管中分别加入不同浓度（0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL）的石榴皮多糖溶液2 mL 以及ABTS 测定液2 mL，振荡混匀后室温下避光反应6 min，立即测定其在734 nm 处的样品吸光度（Ai）。同时将上述样品溶液用2 mL 蒸馏水替代，测定空白吸光度（A0），将2 mL 的ABTS 测定液用2 mL 磷酸盐缓冲液替代，测定其吸光度（Aj），其中A0、Ai 和Aj 中的每个样品做3 次平行试验。ABTS+·清除率（Z，%）按照下列公式计算并求平均值。
Z=[A0-（Ai-Aj）]/A0×100
1.3 数据处理
使用Design-Expert 8.0 中的Box-Behnken 法进行试验设计和分析。采用SPSS 20.0 软件进行数据分析，所有试验重复3 次，结果以平均值±标准差表示，显著性分析采用Duncan 检验，P＜0.05 为差异显著。使用Origin 9.0 绘图。
2 结果与分析
2.1 不同料液比对石榴皮多糖得率的影响
合理利用料液比可以促进原料中活性物质的提取与溶出。不同料液比对石榴皮多糖得率的影响见图1。
图1 料液比对石榴皮多糖得率的影响
Fig.1 Effect of solid-to-liquid ratio on polysaccharide yield
不同字母表示存在显著差异，P＜0.05。
由图1 可知，石榴皮多糖得率随着溶剂体积增加呈现先升高然后降低的趋势，当料液比1∶40（g/mL）时，多糖得率达到最大值，为（26.15±0.33）%。可能是随着溶剂比例的增加，石榴皮粉在溶剂中分散更均匀，加快了石榴皮中多糖物质溶出。但是当料液比进一步增加到1∶50（g/mL），多糖得率逐渐降低，可能是石榴皮在提取的过程中溶出更多的其他物质，影响多糖的溶出和醇沉[18]。 因此选择1∶30、1∶40、1∶50（g/mL）进行后续试验。
2.2 不同微射流压力对石榴皮多糖得率的影响
不同微射流压力对石榴皮多糖得率的影响见图2。
图2 微射流压力对石榴皮多糖得率的影响
Fig.2 Effect of microfluidization pressure on polysaccharide yield
不同字母表示存在显著差异，P＜0.05。
由图2 可知，随着微射流压力的升高，石榴皮多糖得率呈现显著升高然后缓慢降低的趋势，当微射流压力为100 MPa 时，多糖得率达到最大值，为（25.58±0.45）%。当微射流压力超过100 MPa 后多糖得率与100 MPa 时无显著差异（P＞0.05）。可能是因为经微射流压力处理时，石榴皮粉收受到瞬间高剪切力、撞击力以及空穴作用力等作用，降低物料粒径，增加了物料与溶解的接触表面，促进多糖类物质的溶出，提高多糖的得率。而更高的微射流压力虽然也可进一步提高相应的作用力，但是过高的微射流压力可能诱导部分多糖降解，导致多糖得率变化不明显。因此选择75、100、125 MPa 进行后续试验。
2.3 不同提取时间对石榴皮多糖得率的影响
不同提取时间对石榴皮多糖得率的影响见图3。
图3 提取时间对石榴皮多糖得率的影响
Fig.3 Effect of extraction time on polysaccharide yield
不同字母表示存在显著差异，P＜0.05。
由图3 可知，随着提取时间的延长，石榴皮多糖得率显著升高，当提取时间为2.5 h 时，多糖得率最高，为（30.57±0.32）%。可能是随着提取时间延长，溶剂可以更完全地渗入物料中，促进多糖从组织细胞中溶出[19]。而提取时间延长到3.0 h 时，多糖得率明显降低。因此选择2.0、2.5、3.0 h 进行后续试验。
2.4 不同提取温度对石榴皮多糖得率的影响
不同提取温度对石榴皮多糖得率的影响见图4。
图4 提取温度对石榴皮多糖得率的影响
Fig.4 Effect of extraction temperature on polysaccharide yield
不同字母表示存在显著差异，P＜0.05。
由图4 可知，随着提取温度的增加，石榴皮多糖得率呈现先增加后降低的趋势，当提取温度为70 ℃时，多糖得率最高，为（28.35±0.26）%。提取温度过高可能会导致多糖氧化降解，因此选择70 ℃为最佳提取温度。
2.5 响应面优化试验结果分析
2.5.1 响应面试验结果及方差分析
基于Box-Behnken 试验设计的响应面试验设计与分析结果见表2。
表2 响应面优化设计结果
Table 2 Design and results of response surface methodology
试验号X1 料液比X3 提取时间1234567891 0 00111000-1 X2 微射流压力0-1 011-1000-11 12 13 14 15 16 17-1-1 101-1 000-001001100--1 110 100-1-1 1 00001 Y 多糖得率/%28.75±0.12 26.44±0.14 25.74±0.21 25.12±0.19 26.02±0.32 28.82±0.15 28.47±0.24 27.34±0.22 26.98±0.16 26.19±0.34 26.02±0.17 24.87±0.38 28.23±0.14 28.59±0.44 25.21±0.36 25.92±0.51 27.21±0.32
经多元回归拟合分析得到石榴皮多糖得率（Y）与料液比（X1）、微射流压力（X2）以及提取时间（X3）间的二次多元回归方程：Y=28.57-0.2X1+0.64X2+0.28X3-0.42X1X2-0.42X2X3-1.62X12-0.92X22-1.19X32。 回 归 模型的方差分析和显著性检验结果见表3。
表3 回归模型方差分析
Table 3 Analysis of variance for the established regression model
注：P＜0.05 表示影响显著，P＜0.01 表示影响极显著。
方差来源模型X1 X2 X3 X1X2 X1X3 X2X3 X12 X22 X32自由度F 值33.54 3.40 36.64 6.60 7.40 0.54 7.67 117.06 37.91 62.86残差失拟项纯误差总回归平方和28.44 0.32 3.26 0.62 0.7 0.051 0.72 11.03 3.57 5.92 0.66 0.44 0.22 29.10 91111111117341 6均方3.16 0.32 3.26 0.62 0.7 0.051 0.72 11.03 3.57 5.92 0.094 0.15 0.055 2.65 P 值＜0.000 1 0.107 9 0.000 6 0.029 8 0.023 1 0.487 4 0.027 7＜0.000 1 0.000 5 0.010 4＜0.000 1 0.185 1
经过方差分析，该回归方程模型F=33.54，P＜0.000 1，表明该试验所得的回归方程达到极显著水平。而失拟项P=0.185 1＞0.05 不显著，表明模型拟合度较好，误差较小，因此该回归方程模型准确性和可行度较高，动态高压微射流辅助石榴皮多糖提取工艺优化可以利用该模型拟合。相关系数R2=0.977 3，说明该模型拟合度较高，可以解释97.73%的响应值变化。其中校正系数R2Adj=0.948 2，说明影响石榴皮多糖得率有94.82%与所选变量有关，仅有5.18%结果不能被该模型解释。
由表3 可知，一次项X2 微射流压力为极显著因素（P＜0.01），X3 提取时间为显著因素（P＜0.05），因此各因素对石榴皮多糖的影响大小依次是微射流压力＞提取时间＞料液比；二次项X12 和X22 均表现为极显著影响（P＜0.01），X32 表现为显著影响（P＜0.05）；在交互关系中，料液比与微射流压力（X1X2）、微射流压力与提取时间（X2X3）对石榴皮多糖得率影响显著。因素间不是简单的线性关系而是二次抛物面关系，彼此影响。而料液比与提取时间（X1X3）对石榴皮多糖得率的影响不显著（P＞0.05）。
2.5.2 响应面分析
响应面图是对回归方程的形象描述，能够直观反映各个因素与响应值之间的关系以及两个因素间的交互作用，进一步反映对响应值的影响程度[20]。曲面的弯曲程度可以反映各因素对石榴皮多糖得率的影响，曲面越弯曲，说明影响越大，曲面趋于平面则说明影响较小。料液比与微射流压力交互作用对石榴皮多糖得率的影响如图5 所示。
图5 料液比与微射流压力交互作用
Fig.5 The interaction between solid-to-liquid ratio and pressure
由图5 可知，该曲面坡度较为陡峭，说明料液比与微射流压力的交互作用对石榴皮多糖得率的影响显著。等高线图中心越趋于椭圆则各因素之间交互作用明显，等高线图中心越趋于圆形则各因素之间交互作用不显著。料液比与微射流压力的交互作用等高线图中心趋于椭圆形，说明料液比与微射流压力之间的交互作用显著，与表3 方差分析结果相符。
料液比与提取时间交互作用对石榴皮多糖得率的影响如图6 所示。
图6 料液比与提取时间交互作用
Fig.6 The interaction between solid-to-liquid ratio and extraction time
由图6 可知，该曲线更趋于平面，因此料液比与提取温度的交互作用对石榴皮多糖得率的影响较小。等高线图中心趋于圆形且等高线分布疏散，说明料液比与提取时间对石榴皮得率的交互作用不显著，与表3方差分析结果比较相符。
微射流压力与提取时间的交互作用对石榴皮多糖得率的影响如图7 所示。
图7 微射流压力与提取时间交互作用
Fig.7 The interaction between pressure and extraction time
由图7 可知，该曲线较为陡峭，说明微射流压力与提取时间对石榴皮多糖得率有较显著影响。等高线中心椭圆较明显且等高线沿微射流压力轴向分布密集，说明微射流压力与提取时间对石榴皮得率的交互作用显著，与表3 方差分析结果比较相符。
2.5.3 响应面最优条件验证
Design-Expert 软件得出石榴皮多糖提取最佳工艺条件为料液比1∶33.8（g/mL）、微射流压力106 MPa、提取时间2.55 h，预测可能得到的石榴皮多糖最佳得率为29.33%。为了验证模型的可靠性，采用优化的最佳工艺条件进行石榴皮多糖提取，考虑到实际操作可行性，将工艺参数调整为料液比1∶34（g/mL）、微射流压力106 MPa、提取时间2.6 h。重复3 次，取平均值得到石榴皮多糖最佳得率为（29.07±0.42）%，这与模型预测的理论值较接近。结果表明，该响应面模型优化得到的动态高压微射流辅助提取石榴皮工艺参数真实可靠，具有一定的实际可操作性。
2.6 石榴皮多糖抗氧化活性分析
2.6.1 石榴皮多糖对DPPH 自由基的清除作用
DPPH 自由基是一种稳定的自由基，而紫色的DPPH 自由基可以被抗氧化剂还原为黄色的二苯肼，这是用于评价体外抗氧化活性的主要方法。DPPH 自由基具有单一电子，抗氧化剂能与其进行配对，在517 nm处有最大光吸收，抗氧化能力可以通过光吸收的减弱程度进行判断[21]。不同质量浓度石榴皮多糖对DPPH自由基清除率的影响如图8 所示。
图8 石榴皮多糖对DPPH 自由基的清除作用
Fig.8 DPPH radical scavenging activity of polysaccharides from pomegranate peel
同一指标不同字母表示存在显著差异，P＜0.05。
由图8 可知，随着浓度的增加，石榴皮多糖对DPPH 自由基的清除能力先增大后趋于稳定。低浓度（0.1～0.6 mg/mL）时，与相同浓度的VC相比，石榴皮多糖对DPPH 自由基的清除能力较强。当石榴皮多糖浓度达到0.8 mg/mL 时，清除率达到最高，为（93.14±0.76）%，IC50值为（0.35±0.05）mg/mL。此结果与1.0 mg/mL VC 对DPPH 自由基的清除率相当；当浓度为1.0 mg/mL 和1.2 mg/mL 时，清除率与0.8 mg/mL 浓度相比，无显著性差异（P＞0.05）。结果表明，石榴皮多糖对DPPH 自由基有明显的清除作用，可能是因为石榴皮多糖能够作为一种供氢物质与自由基发生反应，从而生成稳定物质阻止了自由基链式反应[22]。
2.6.2 石榴皮多糖对·OH 的清除作用
·OH 是机体中最活跃的活性氧自由基，可穿透细胞膜直接作用于蛋白质、核酸、脂质等生物分子，造成组织损伤或细胞死亡，也可引起机体发生衰老、癌变及其他疾病[23]。不同质量浓度的石榴皮多糖对·OH 清除率的影响如图9 所示。
图9 石榴皮多糖对·OH 的清除作用
Fig.9 OH radical scavenging activity of polysaccharides from pomegranate peel
同一指标不同字母表示存在显著差异，P＜0.05。
由图9 可知，石榴皮多糖对·OH 的清除能力随着浓度的增加呈现先增大后趋于稳定的趋势，当石榴皮多糖浓度为1.0 mg/mL 时，清除率最高，为（62.04±1.24）%，其IC50 值为（0.62±0.11）mg/mL。当浓度继续增加到1.2 mg/mL 时，清除率与1.0 mg/mL 浓度相比，无显著性差异（P＞0.05）。与同浓度的VC 相比，石榴皮多糖对·OH 清除率虽然均低于VC，但其仍有一定的清除能力。结果表明，石榴皮多糖对·OH 具有一定的清除作用。
2.6.3 石榴皮多糖对ABTS+自由基的清除作用
ABTS+自由基由ABTS 氧化产生，呈稳定的蓝绿色，在734 nm 处有最大吸收峰，ABTS+自由基与抗氧化物质发生反应后出现褪色现象，吸光度也逐渐下降，因此可用于评价抗氧化活性[24]。不同质量浓度的石榴皮多糖对ABTS+自由基清除率的影响如图10 所示。
图10 石榴皮多糖对ABTS+自由基的清除作用
Fig.10 ABTS+radical scavenging activity of polysaccharides from pomegranate peel
同一指标不同字母表示存在显著差异，P＜0.05。
由图10 可知，与同浓度的VC 相比，花椒叶多酚对ABTS+自由基清除率较弱，但其仍有一定的清除能力。随着浓度的增加，石榴皮多糖对ABTS+自由基的清除能力呈现先增大后趋于稳定的趋势，但均低于相同浓度的VC。当多糖浓度为1.0 mg/mL 时，清除率达到最高，为（85.85±0.98）%，其IC50 值为（0.50±0.08）mg/mL。当浓度继续增加到1.2 mg/mL 时，清除率与1.0 mg/mL浓度相比，无显著性差异（P＞0.05）。结果表明，清除率与石榴皮多糖质量浓度呈量效关系，且石榴皮多糖对ABTS+自由基具有明显的清除效果。
3 结论
分别考察料液比、微射流压力、提取时间3 个因素对动态高压微射流辅助提取石榴皮多糖得率的影响，通过响应面法优化确定石榴皮多糖提取的最佳工艺条件为料液比1∶34（g/mL）、微射流压力106 MPa、提取时间2.6 h。在此工艺条件下，石榴皮多糖的得率为（29.07±0.42）%。体外抗氧化试验结果表明石榴皮多糖具有较好的体外抗氧化活性，清除DPPH 自由基、·OH、ABTS+自由基的IC50值分别为（0.35±0.05）、（0.62±0.11）、（0.50±0.08）mg/mL，其中对·OH 的清除效果最好，其次是ABTS+自由基。因此，石榴皮多糖作为食品功能活性成分，具有在食品加工领域进一步开发应用的潜力。
[1] KADERIDES K, KYRIAKOUDI A, MOURTZINOS I, et al. Potential of pomegranate peel extract as a natural additive in foods[J].Trends in Food Science&Technology,2021,115:380-390.
[2] ALI KHAN A,ALANAZI A M,ALSAIF N,et al.Pomegranate peel induced biogenic synthesis of silver nanoparticles and their multifaceted potential against intracellular pathogen and cancer[J].Saudi Journal of Biological Sciences,2021,28(8):4191-4200.
[3] WU Y,ZHU C P,ZHANG Y,et al.Immunomodulatory and antioxidant effects of pomegranate peel polysaccharides on immunosuppressed mice[J]. International Journal of Biological Macromolecules,2019,137:504-511.
[4] 邓爱华,汤须崇,刘凤英,等.响应面法优化超声波辅助提取石榴皮多糖的工艺[J].分子植物育种,2019,17(1):270-276.DENG Aihua, TANG Xuchong, LIU Fengying, et al. Optimization of pomegranate peel polysaccharides by ultrasonic assisted extraction based on response surface methodology[J]. Molecular Plant Breeding,2019,17(1):270-276.
[5] 陈龙.石榴皮多糖的制备、鉴定及其抗氧化活性研究[D].南京:南京农业大学,2012.CHEN Long. Preparation, identification and antioxidant activity of pomegranate peel polysaccharide[D]. Nanjing: Nanjing Agricultural University,2012.
[6] 程朗,陈红玲,徐蓓蓓,等.响应面优化超声辅助酶法提取石榴皮多糖的工艺[J].农产品加工,2022(10):58-63.CHENG Lang, CHEN Hongling, XU Beibei, et al. Response surface optimization of ultrasound-assisted enzymatic extraction of polysaccharide from pomegranate peel[J]. Farm Products Processing,2022,19:58-63.
[7] 纪慧杰, 朱彩平. 石榴皮多糖的提取及组成、体外降脂活性研究[J].食品与发酵工业,2022,49(4):161-168.JI Huijie,ZHU Caiping.Study on the extraction and composition of pomegranate peel polysaccharide and hypolipidemic activity in vitro[J].Food and Fermentation Industries,2022,49(4):161-168.
[8] ARUN K B, MADHAVAN A, ANOOPKUMAR A N, et al. Integrated biorefinery development for pomegranate peel: Prospects for the production of fuel, chemicals and bioactive molecules[J]. Bioresource Technology,2022,362:127833.
[9] 王文丽,张金玲,魏亚宁,等.天然多糖提取、纯化及生物活性研究进展[J].食品工业科技,2022,43(22):470-480.WANG Wenli, ZHANG Jinling, WEI Yaning, et al. Extraction, purification and bioactivity of natural polysaccharides: A review[J].Science and Technology of Food Industry,2022,43(22):470-480.
[10] 赵岩岩,吴赛乐,张浩,等.动态高压微射流辅助提取对鱼鳞多糖抗氧化活性的影响[J].食品工业科技,2020,41(14):46-51.ZHAO Yanyan, WU Saile, ZHANG Hao, et al. Effects of dynamic high pressure microfluidization-assistant extraction on the antioxidation of polysaccharide from carp scales[J]. Science and Technology of Food Industry,2020,41(14):46-51.
[11] MARTÍNEZ-MONTEAGUDO S I, YAN B, BALASUBRAMANIAM V M.Engineering process characterization of high-pressure homogenization—From laboratory to industrial scale[J]. Food Engineering Reviews,2017,9(3):143-169.
[12] 秦令祥,周婧琦,崔胜文,等.动态超高压微射流法提取黑木耳多糖工艺研究[J].食品研究与开发,2019,40(19):155-159.QIN Lingxiang, ZHOU Jingqi, CUI Shengwen, et al. Study on extraction of polysauharides from Auricularia auricular by dynamic high pressure micro-fluidization technology[J]. Food Research and Development,2019,40(19):155-159.
[13] 张辰辰,宋江峰,刘元法,等.牛蒡根多糖动态高压微射流提取工艺优化及体外抗氧化活性研究[J]. 食品工业科技, 2023, 44(12):260-267.ZHANG Chenchen, SONG Jiangfeng, LIU Yuanfa, et al. Optimization of dynamic high pressure microfluidization -assisted extraction of burdock root polysaccharide and its in vitro antioxidant activity[J].Science and Technology of Food Industry,2023,44(12):260-267.
[14] 涂宗财,寇玉,王辉,等.荷叶多糖的超声波辅助提取和抗氧化活性[J].食品科学,2013,34(16):108-112.TU Zongcai, KOU Yu, WANG Hui, et al. Ultrasonic-assisted extraction and antioxidant activity of polysaccharides from Lotus leaves[J].Food Science,2013,34(16):108-112.
[15] GONG G P,DANG T T,DENG Y N,et al.Physicochemical properties and biological activities of polysaccharides from Lycium barbarum prepared by fractional precipitation[J]. International Journal of Biological Macromolecules,2018,109:611-618.
[16] LU C R, LI H Y, LI C, et al. Chemical composition and radical scavenging activity of Amygdalus pedunculata Pall leaves′ essential oil[J].Food and Chemical Toxicology,2018,119:368-374.
[17] LI L, XUE Y, ZHANG H N, et al. A new polysaccharide isolated from Dendrobium offcinale, stimulates aquaporin-3 expression in human keratinocytes[J].Food Science and Technology,2021,41(1):90-95.
[18] 刘杰,李雅双,包瑛,等.响应面试验优化新疆阿魏根多糖微波辅助提取工艺及其体外抗氧化活性[J].食品科学,2015,36(22):57-62.LIU Jie, LI Yashuang, BAO Ying, et al. Extraction optimization of polysaccharides from the roots of Ferula sinkiangensis K.M.Shen and their antioxidant activities in vitro[J]. Food Science, 2015, 36(22):57-62.
[19] VINATORU M. Ultrasonically assisted extraction (UAE) of natural products some guidelines for good practice and reporting[J]. Ultrasonics Sonochemistry,2015,25:94-95.
[20] 杨天友,孙秋婷,王琴,等.响应面超声波法提取腾茶多酚工艺优化[J].粮食与油脂,2020,33(6):77-80.YANG Tianyou, SUN Qiuting, WANG Qin, et al. Optimization of extraction process of tea polyphenols from Ampelopsis grossedentata by response surface ultrasonic assisted method[J]. Cereals & Oils,2020,33(6):77-80.
[21] WANG S Y,SONG L X,LI J L,et al.Optimization of ultrasonic-assisted extraction of polysaccharide from fig leaves and its antioxidant activity[J].Food Science and Technology,2022,42:e77922.
[22] SAH B N P,VASILJEVIC T,MCKECHNIE S,et al.Effect of refrigerated storage on probiotic viability and the production and stability of antimutagenic and antioxidant peptides in yogurt supplemented with pineapple peel[J]. Journal of Dairy Science, 2015, 98(9):5905-5916.
[23] 陈红惠,牛念拉姆.底圩茶多糖的超声波辅助提取及其抗氧化活性[J].食品工业科技,2020,41(21):179-184.CHEN Honghui, NIU Nianlamu. Ultrasonic extraction and antioxidant activity of polysaccharide from dixu tea[J]. Science and Technology of Food Industry,2020,41(21):179-184.
[24] 袁清霞.桑叶多糖分离纯化、结构分析及生物活性研究[D].南京:南京农业大学,2016.YUAN Qingxia. Isolation, purification, structure and bioactivity of polysaccharides from mulberry (Morus alba L.) leaves[D]. Nanjing:Nanjing Agricultural University,2016.