山芹属(Ostericum Hoffm.)隶属于伞形目伞形科,其茎中空直立,叶片多为淡绿色,果实表皮细胞靠近维管组织,多为二年生或多年生草本植物[1]。我国山芹属植物主要包含隔山香(Angelica citriodora Hance)、大齿山芹[Ostericum grosseserratum(Maxim.)Kitag]、全叶山芹[Ostericum maximowiczii(Fr.Schmidt ex Maxim.)Kitagawa]和山芹[Ostericum sieboldii(Miq.)Nakai]等[2]。其中,隔山香主要分布于华南地区,其余分布于东北、西北和华东地区。目前,山芹属植物大部分为野外生长,在东北地区也出现小面积的人工种植[3]。研究表明,山芹属植物富含黄酮、多糖和挥发油等[4],具有清热解毒和滋阴养颜等功效,可以缓解风湿痹痛、腰膝酸痛和感冒头痛等症状[5]。目前,山芹属植物主要作为山野菜资源食用或用于饲料,利用率极低。因此,本文对山芹属中主要植物的有效成分及生物活性等方面进行综述,旨在为该属植物的深入研究及其在医药、食品等领域的开发应用提供参考。
山芹属作为广义当归属的成员之一,其有效成分主要包括黄酮类、多糖和挥发油等。近年来已有部分学者对山芹属有效成分进行了提取和分离[6],为后续生物活性及构效关系的研究提供了一定的前期基础。目前,对于该属隔山香、大齿山芹和山芹的有效成分的提取方面研究较多,提取方法主要依据其在不同条件下的存在状态、溶解性等物理及化学性质来确定[7];而对于山芹属其他植物有效成分的研究极少。
黄酮类化合物在植物中广泛存在,是植物次生代谢产物,泛指2个苯环通过3个碳原子相互连接而成的一系列化合物。山芹属植物中的黄酮类化合物常用的提取方法包括热水浸提法和有机溶剂提取法。其中,有机溶剂的选择对其提取率会产生一定影响[8],目前常用的有机溶剂包括乙醇和甲醇等[9-10]。蒋新龙[11]通过热水浸提法提取山芹菜中的黄酮类化合物,经过方差分析确定其最佳提取条件为提取温度80℃,提取时间2 h,此条件下黄酮得率为1.71%,研究表明,从山芹属植物中提取的黄酮类化合物主要为芹菜素。汤须崇[12]用乙醇加热回流提取和二氯甲烷萃取的方法,从隔山香的干燥根中分离出4种黄酮类化合物,分别为芹菜素、二氢槲皮素、3,5,7-三羟基-3′,4′-二甲氧基-黄烷酮和 1-(2,6-二羟基-4-甲氧基-苯基)-3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-2-丙烯-1-酮,其中芹菜素的得率最高,在4种化合物中所占比例为35.3%。此外,不同地区山芹植株同一部位中的黄酮类化合物存在差异。
多糖是植物体内很重要的一类生物大分子物质,以α-糖苷键或β-糖苷键连接多种相同或者不同的单糖所组成的一类化合物,目前已被广泛应用于食品和药品等多种领域[13-14],而对山芹属植物多糖的研究较少,仅为简单的多糖含量测定。单琳等[15]测定了部分野生芹菜的多糖含量,发现大齿山芹中多糖含量约为家芹的1.5倍,证明其含有较高的多糖成分。植物多糖分离纯化复杂,但提取高纯度的植物多糖能够为后续生物构效关系的研究奠定基础,因此探究更加高效的山芹属植物多糖提取条件及后续分离纯化方法对山芹属植物的开发利用具有重大意义。
山芹属植物富含以萜类化合物为主的挥发油成分,该成分是植物通过不同代谢途径合成的次生代谢物。目前,山芹属植物挥发油常用的提取方法为水蒸气蒸馏法(steam distillation extration,SDE)和超临界CO2流体萃取法(supercritical fluid CO2extraction,SFECO2)。根据提取方法的不同,同种植物提取的挥发油成分及含量存在一定差异[16]。Liu等[17]用水蒸气蒸馏法从山芹菜地面以上的生长部位提取挥发油,经气相色谱-质谱联用仪(gas chromatograph-mass spectrometer,GC-MS)鉴定出42种成分,其中肉豆蔻醚、α-松油醇和杜松醇含量较高。Zhang等[18]用水蒸气蒸馏法提取绿花山芹地面以上生长部位的挥发油,经GC-MS鉴定其中成分,发现β-石竹烯和α-胡萝卜烯含量较高。薛怡琛等[19]用水蒸气蒸馏法提取大齿山芹根挥发油,经GC-MS分析鉴定出96种化学成分,其中辛醛和β-派烯含量较高。张军等[20]用水蒸气蒸馏法提取隔山香全株的挥发油,经GC-MS分析得到47种成分,其中人参炔醇和肉豆蔻醚含量较高。苏孝共等[21]用水蒸气蒸馏法提取浙产隔山香不同部位(根、叶和果实)中的挥发油,进一步通过GC-MS分析比较化学成分发现:浙产隔山香根挥发油主要成分为左旋-α-蒎烯,叶挥发油中主要成分为石竹烯及其氧化物,果实挥发油主要成分为洋芹脑。综上所述,采用水蒸气蒸馏法提取山芹属植物的挥发油成分,其中不同植株的同一部位含有的挥发油成分不同,同一植株的不同部位挥发油成分的种类及含量也存在明显差异。随着工业化生产模式的不断扩大,植物挥发油的提取方法在不断改进[22]。孙广仁等[23]比较超临界CO2流体萃取法与水蒸气蒸馏法提取山芹菜果实中挥发油的效率,其挥发油得率分别为5.50%和0.78%,且超临界CO2萃取法所分离出的挥发性物质种类数量更为丰富,说明利用超临界CO2萃取法提取山芹属挥发油成分的效率更高。
研究表明,山芹属植物除含有上述3种有效成分外,还含有维生素、香豆素、奎宁酸、类固醇和小分子脂肪酸等[24-27]。单琳等[15]根据国家标准法测定大齿山芹和普通家芹中的维生素C含量,结果显示大齿山芹维生素C含量为3.01%,高于普通家芹。魏培海等[28]通过分光光度法测定出山芹菜中维生素C含量为0.57%。由此可见,山芹属植物中维生素C含量整体较低。汤须崇[12]通过硅胶柱层析、制备型薄层层析等方法从隔山香干燥根的乙酸乙酯萃取物中分离纯化出两个奎宁酸类化合物、一个香豆素类化合物和三个类固醇化合物。丁云梅等[29]通过中性氧化铝柱层析的方法从隔山香根的乙醚萃取物中分离纯化出类固醇化合物β-谷甾醇。张军[30]通过硅胶柱色谱对隔山香醇提浸膏的石油醚部位和乙酸乙酯部位进行分离纯化,得到12种化合物,其中包含有十二烷酸和十六烷酸等小分子脂肪酸。薛怡琛等[31]通过硅胶柱层析、薄层层析的方法从大齿山芹根的石油醚-乙酸乙酯萃取物中分离纯化出肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸等小分子脂肪酸。山芹属植物中有效成分复杂,明确及分离纯化其有效成分将为深入了解山芹属植物相关特点奠定基础。
山芹属植物体内活性物质含量丰富,具有较高的药用和食用价值。研究表明,山芹属植物中可作药材的种类占整个属的71.4%,且用药部位多样,其全草、根茎、花、叶和果实等皆可入药[2]。目前大量试验证明,山芹属植物具有抗肿瘤、抗炎和舒张血管等生物活性。
研究表明,山芹属植物具有良好的抗肿瘤活性。Lee等[32]从朝鲜山芹中分离纯化出8种化合物,包括4种倍半萜化合物(甾体酮 A、B、C、D)、没药烷吉酮、紫花前胡醇当归酯、补骨脂素和镰叶芹二醇。进一步以熊果苷为阳性对照,探究8种化合物对小鼠黑色素瘤细胞(B16)中黑色素合成的抑制作用。结果表明,8种化合物抑制黑色素合成的效果均高于熊果苷对照组,其中甾体酮A的抑制效果最佳,说明倍半萜类化合物对小鼠黑色素瘤细胞的活性有一定影响,具体机制还有待探究。陆国忠[33]对山芹中的黄酮类化合物的主要成分芹菜素进行A、B环结构修饰,引入亲脂基团后合成18个芹菜素衍生物,并研究它们对体外人结肠癌(human colon cancer-29,HT-29)细胞和人急性粒细胞白血病(human promyelocytic leukemia cells-60,HL-60)细胞的影响,发现其中一种新合成的芹菜素衍生化合物6对HT-29和HL-60细胞增殖有明显的抑制作用,说明经过结构修饰的芹菜素能够抑制细胞增殖,对人类结肠癌和急性白血病的治疗意义重大。倍半萜类化合物多以醇、酮、内酯等形式存在于植物体挥发油中,由此可见,山芹属植物中的酮类物质可能是其具有抗肿瘤活性的原因之一。
研究表明,植物次级代谢产物能够有效治疗人类疾病[34],是筛选具有抗炎活性化合物的天然药物来源。田文艺等[35]利用隔山香的蒸馏液治疗巴豆油混合致炎液引起的小鼠耳朵肿胀,其对肿胀的抑制率高达44%,与具有抗炎作用的肾上腺皮质激素类药地塞米松磷酸钠溶液(0.25%)相当,说明隔山香中含有抗炎的活性物质,且抗炎效果较好。Jung等[36]用甲醇浸提得到山芹根部中的有机化合物没药当归烯酮,进一步通过脂多糖刺激小鼠巨噬细胞释放炎症因子的免疫模型来探究其抗炎作用,该化合物可以阻断巨噬细胞NF-κB和MAPK信号转导途径,从而抑制脂多糖刺激的炎症反应,证明山芹具有一定抗炎效果。
心血管疾病目前已成为人类所面临的一大问题,我国每年有约300万人死于缺血性心血管病。该病发病机制复杂,与血管平滑肌细胞中的内皮素B亚型(endothelin B,ETB)受体息息相关[37-38]。近年来有部分学者探究隔山香中有机萃取部位对血管的舒张作用。马允慰等[39-40]从隔山香乙醚提取物中分离得到苯丙烯类衍生物异莳萝脑,仿照佛契哥特法,以兔主动脉条为研究对象,探究异莳萝脑对兔主动脉条收缩抑制作用。结果表明,异莳萝脑化合物能够拮抗高K+和去甲肾上腺素激动的主动脉收缩。刘磐[41]从隔山香乙酸乙酯部位分离得到苯丙素类成分及异莳萝脑乙二醇(isodillapiolglycol,ISO),发现它们具有舒张血管的功能。其中不同剂量的ISO对经过去甲肾上腺素及氯化钾预收缩后的血管环(内皮完整、去除内皮)有显著的舒张作用。体现出血管舒张活性。童国勇[42]研究了隔山香不同极性部位萃取物溶液的血管舒张活性,发现石油醚部位和乙酸乙酯部位可以通过促进NO释放使血管充分舒张,且隔山香萃取物溶液在低浓度条件下能够促进血管平滑肌细胞生长,高浓度条件下则抑制血管平滑肌细胞生长,从而影响血管舒张。银杉杉[43]研究发现,隔山香各极性部位萃取物(石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物)均具有舒张血管的活性,其机制可能与抑制Ca2+释放有关。由上述结论可知,隔山香植物的有机萃取部位有血管舒张的活性,在天然植物防治心血管疾病方面有重要意义。Lee等[44]研究了山芹根的乙醇提取物(an ethanol extract of the O.koreanumroot,EOK)舒张心血管的作用机制,通过离体大鼠主动脉环评估发现,EOK的血管舒张作用是由左旋精氨酸-一氧化氮-环磷酸鸟苷信号通路诱导NO形成、通过受体操作Ca2+通道和胞外Ca2+流入,以及抑制肌浆网Ca2+释放来共同达到舒张目的。综上所述,山芹属植物的有机萃取部位是影响舒张血管的关键,它们能够通过诱导血管中NO释放、抑制Ca2+释放来达到舒张血管目的。
近年来,研究发现许多植物精油对害虫具有毒杀、熏蒸和驱避等抗虫活性[45-48]。康进等[49]研究了大齿山芹挥发油对植物朱砂叶螨的杀螨活性。采用玻片法进行触杀活性测定,发现大齿山芹杀螨半数致死浓度达到1.631 4 mg/mL,显示出良好的杀螨活性。Liu等[17]发现山芹地上开花部分提取的精油具有一定杀虫活性,尤其是对玉米赤霉菌和栗树成虫具有熏蒸毒性和触杀毒性,在空气中的半数致死浓度为27.39 mg/L和20.92 mg/L。目前,山芹属植物挥发油杀虫机理研究鲜见,但研究表明植物精油杀虫与昆虫体内解毒酶相关[50]。外源物质会抑制昆虫体内解毒酶抑制代谢水平,从而影响昆虫正常生理代谢活动。因此,利用天然植物挥发油为原料制作杀虫剂具有巨大开发前景。
研究表明,山芹属植物具有一定的抑菌活性。Shin[26]研究朝鲜山芹精油的抑菌活性,发现其主要成分α-蒎烯和甲基酚能够抑制沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌,进一步通过棋盘试验分析,朝鲜山芹精油和抗生素协同使用时,联合抑菌指数(fractional inhibitory concentration index,FICI)小于0.5,明确了朝鲜山芹精油和抗生素有协同作用,使抑菌效果更显著。田文艺等[35]发现隔山香干燥根的蒸溜液对甲型链球菌、乙型链球菌、流感杆菌和肺炎杆菌有一定的抑制作用,具体抑制机制还未进行深入探究。
山芹属植物除了具有上述5种生物活性外,还具有止泻、祛痰和延缓衰老等生理功能。梁土亮[51]研究了隔山香挥发油的止泻药效及挥发油主要成分异芹菜脑的体内药物动力学,建立不同给药途径下(口服、贴敷)的致泻模型,结果显示两种给药方式的有效止泻浓度均在30%以下,证明隔山香挥发油具有治疗大肠和小肠腹泻的功能;异芹菜脑经超高效液相色谱-串联四极杆质谱(ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)生物样品分析后出现双峰,推测为异芹菜脑被肠肝循环和多部位吸收,为隔山香挥发油相关制剂的设计提供了依据。刘元等[52]通过呼吸道酚红冲洗法结合毛细玻管排痰法研究隔山香水煎液的祛痰作用,发现以生理盐水为空白对照时隔山香水煎液酚红排泌量相对百分率为139.7%,给药后大鼠排痰量为未给药时的252.8%,证明隔山香水煎液有助于大鼠排痰,隔山香祛痰效果十分显著。Moon等[53]研究了山芹的抗衰老机制,发现其主要通过降低细胞周期调控点相关蛋白p16、p21和p53的表达水平,从而延迟H2O2诱导人二倍体成纤维细胞(human diploid fibroblasts,HDFSs)以及降低氧化应激能力,达到延缓衰老效果,证明山芹具有较好的抗衰老活性。此外,也有文献表明山芹全株可入药,具有活血降压的功效[54]。
近些年来,随着人们生活水平的不断提高,天然药食同源植物作为新食物资源的主要来源之一,越来越受到人们的重视。许多常作药物的山野菜资源被列入药食同源目录,药食同源植物资源的开发利用前景可期。但目前关于山芹属植物的研究基本停留在提取鉴定和简单的生物活性研究等方面,对其具体化学成分的分离提纯和生物构效关系研究较少。因此,研究山芹属植物的功能因子和明确构效关系,将为山野菜功能性食品的开发和医药领域应用提供理论基础,并将推动天然植物产品的精深加工。
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