韭菜（Allium tubeiosum Rottl.ex Spreng.）叶、茎、籽均可食用[1]，且具有较好的杀菌消炎、促进食欲，以及降低血糖血脂作用，并且对高血压和冠心病的治疗也具有一定疗效[2-6]。其因特有风味而为国人所喜食，作为一种特色蔬菜，在我国绝大部分地区均有种植，特别在我国北方大棚、拱棚和露地广泛种植。
韭菜灰霉病，和韭菜迟眼蕈蚊（Bradysia odoriphaga），幼虫俗称韭蛆，是韭菜生长过程中主要的病虫害，对韭菜产量和品质有着较大的影响。韭菜灰霉病防治药剂很少，目前获得登记的仅有腐霉利可湿性粉剂和烟剂。其对韭菜灰霉病防治效果较好，但有报道称韭菜灰霉病对腐霉利产生了一定程度的抗药性[7-8]，因而韭菜病虫害的防治还需要寻找新的替代农药，或加强韭菜的综合防治。韭菜病虫害的防治方法有物理防治[9]、生物防治[10-11]以及化学防治[12]，但以化学防治为主，也有以生物防治和化学防治相结合的防治措施[13]。辛硫磷和吡虫啉等是韭蛆防治的主要登记用药，不能为了达到防治效果，违规使用毒死蜱等禁用农药[14]。在现代化农业进程中，韭菜田除草剂的使用也必不可少，二甲戊灵是韭菜田常用的除草剂[15]。
韭菜中常见农药残留的检测多用气相色谱法[16]、气相色谱串联质谱法[17-18]、液相色谱[19]和液相色谱-串联质谱法[20-24]。为进一步研究韭菜中常用病虫害防治药剂腐霉利、辛硫磷、吡虫啉、氧乐果和二甲戊灵等典型农药，及禁用的毒死蜱、克百威和甲拌磷等农药的使用及残留情况，本研究通过超高效液相色谱-串联质谱（ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry，UPLC-MS/MS）分析了韭菜样品中农药的残留情况，并对腐霉利消解进行分析，评价了其在露地韭菜和设施韭菜中的消解差异。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
乙腈（分析纯）：天津市康科德科技有限公司；乙腈（色谱纯）：默克公司；超纯水：自制；甲酸（色谱纯）、氯化钠（分析纯）：天津市风船化学试剂科技有限公司；石墨化碳氨基柱（GCB/NH2，500 mg/500 mg，6 mL）：岛津企业管理（中国）有限公司；50%腐霉利可湿性粉剂：陕西亿农高科药业有限公司；韭菜样品：采自天津市武清区、宝坻区、蓟州区等多地；标准品腐霉利、辛硫磷、吡虫啉、氧乐果、二甲戊灵、毒死蜱、克百威、3-OH克百威、甲拌磷、甲拌磷砜和甲拌磷亚砜，含量分别 为 93.0% 、99.0% 、93.0% 、99.0% 、98.5% 、93.0% 、99.0%、93.0%、99.0%、98.5%和98.5%：天津阿尔塔科技有限公司。
1.2 仪器与设备
超高效液相色谱仪（Waters H-Class）：美国Waters公司；三重四极杆质谱仪，配电喷雾离子源（Xevo TQS）：美国 Waters公司；旋涡混合器（QL-901）：江苏海门其林贝尔仪器制造有限公司；高通量组织研磨仪（CK2000）：托摩根生物科技有限公司；旋转蒸发仪（Laborota 4000 efficient）：德国 Heidolph；Milli-Q 超纯水仪：美国Millipore公司。
1.3 田间设计及采样
韭菜田间验证试验分为露地韭菜和设施韭菜试验，均在天津市武清区进行，试验小区50 m2，并设对照小区30 m2。根据登记农药制剂，50%腐霉利可湿性粉剂在韭菜上防治灰霉病的最大推荐剂量，450 g ai/ha，喷雾施药 1 次，于施药后采集 2 h、1、2、3、5、7、10、14、21、28、30、35、42 d 的韭菜样品，每次采集两个平行样品，低于-18℃储存待处理测定。
1.4 分析方法
采用超高效液相色谱-串联质谱法对目标农药进行定性和定量分析。按照农药的残留定义，部分药物的残留值以其本体及代谢物残留值的和进行计算。MassLynx 4.1工作站进行数据采集与分析，基质匹配外标法定量。
1.4.1 前处理方法
提取：称取10 g试样（精确到0.01 g）于50 mL具塞离心管中，加入20mL乙腈，5mL水，1200strokes/min垂直振荡15 min，加入3 g氯化钠，再以1 200 strokes/min垂直振荡5min，4000r/min离心5min。取上清液5 mL于10 mL离心管中，氮吹至约2 mL，待净化。
净化：取上述待净化液加入到经5 mL乙腈预淋洗过的石墨化碳氨基小柱，用5 mL乙腈分两次洗涤离心管，洗涤液加入小柱中，待液面快要流干时分次加入20 mL乙腈洗脱小柱，收集全部流出液，浓缩至近干，用2.5 mL乙腈复溶解，过0.22 μm有机滤膜，待测。
1.4.2 液相色谱-串联质谱条件
液相色谱条件为色谱柱：Acquity UPLC HSS T3（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；柱温：40 ℃；进样量：2 μL；流速：0.3 mL/min。
线性梯度洗脱程序：0～1 min，10%A～90%A；1 min～3 min，90%A；3 min～4 min，10%A。梯度洗脱程序：0～1 min，乙腈和0.1%甲酸水的体积比从10∶90逐渐变为90∶10；1 min～3 min，乙腈和0.1%甲酸水的体积比保持为90∶10；3 min～4 min，乙腈和0.1%甲酸水的体积比保持为 10∶90。
质谱条件为离子源：ESI（+）；毛细管电压：3.0 kV；离子源温度：150℃；脱溶剂气温度：500℃；锥孔反吹气流量：150 L/h；脱溶剂气流量：1 000 L/h；雾化气流量：0.7 MPa。检测方式为多反应监测扫描模式（multiresponse monitoring scanning mode，MRM），如表1。
表1 8种农药及其代谢物的质谱检测条件
Table 1 Mass-spectrometric conditions for determining of eight pesticides and its metabolites
注：*定量离子对。
农药 母离子（m/z）驻留时间/s子离子（m/z）锥孔电压/V碰撞电压/V毒死蜱 349.9 97 0.025 27 32 198* 0.025 20克百威 222.11 123 0.025 25 16 165.1* 0.025 16 3-OH-克百威 238 163 0.025 25 16 181* 0.025 10氧乐果 214.1 125.1 0.025 16 22 183.1* 0.025 11腐霉利 284.1 67.1 0.025 33 28 256.1* 0.025 17辛硫磷 299 129* 0.025 12 13 153 0.025 7吡虫啉 256.1 175.1 0.025 23 20 209.1* 0.025 15二甲戊灵 282.2 194.1 0.025 12 17 212.2* 0.025 10甲拌磷 261 75* 0.025 10 12 97 0.025 32甲拌磷砜 293 96.9 0.025 15 30 115* 0.025 24甲拌磷亚砜 277 96.9 0.025 15 32 143* 0.025 20
1.4.3 方法灵敏度、准确度和精密度
考虑到基质效应对农药检测的影响，试验用标准品溶液均采用基质溶液配制，各农药分别做3个浓度的添加试验，添加浓度为0.01 mg/kg～0.50 mg/kg，定量限均为0.01 mg/kg。按照上述提取、净化和测定方法，做5个平行测定，各农药的回收率均为70%～120%，相对标准偏差（relative standard deviation，RSD）不大于15%，所有数据符合农药残留检测要求。
1.5 腐霉利消解模拟试验
分别以50%腐霉利可湿性粉剂在露地韭菜和设施韭菜消解模拟试验的采样间隔期为横坐标，以采样间隔期对应的两个平行样品中腐霉利残留量的平均值为纵坐标，绘制腐霉利消解指数曲线。
2 结果与分析
2.1 8种农药及其代谢物测定结果
8种农药及其代谢物平均回收率与精密度见表2。
表2 8种农药及其代谢物平均回收率与精密度（n=5）
Table 2 Average recoveries，relative standard deviation（RSD）of eight pesticides and its metabolites（n=5）
添加水平/（mg/kg）农药名称 0.01 0.02 0.05 0.1 0.2 0.5回收率/% 回收率/% 回收率/% 回收率/% 回收率/% 回收率/%RSD/%毒死蜱 86.7 88.2 88.6 2.4克百威 94.1 87.2 88.0 1.8 3-OH-克百威 96.6 86.5 85.3 0.9氧乐果 89.8 89.1 89.0 1.2腐霉利 88.7 89.8 91.9 2.0辛硫磷 95.2 87.9 88.3 1.9吡虫啉 91.2 87.8 87.2二甲戊灵 85.4 88.5 90.0 2.7甲拌磷 96.2 88.2 89.5 3.6甲拌磷砜 92.8 84.4 81.8 5.6甲拌磷亚砜 92.3 88.7 89.5 0.3 RSD/%4.9 2.2 2.6 3.2 3.0 6.3 2.7 4.7 12.3 4.7 2.6 RSD/%RSD/%RSD/%1.6 RSD/%1.7 2.8 2.1 1.3 1.9 1.61.2 2.2 2.9 6.8 2.2
2.2 8种农药检测结果
按照我国GB2763—2019《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》[25]要求，对所采集的126批次韭菜样品进行分析，克百威的残留量以克百威和3-羟基克百威之和表示，甲拌磷的残留量以甲拌磷、甲拌磷砜和甲拌磷亚砜三者之和表示。8种农药的结果如表3所示。
表3 8种农药的检测结果
Table 3 Determining results of eight pesticides
检测项目检出项次检出率不合格项次限量要求/（mg/kg）毒死蜱 8 6.3 5 0.1克百威 7 5.6 7 0.02（鳞茎类蔬菜）氧乐果 0 0 0 0.02（鳞茎类蔬菜）腐霉利 33 26.2 11 0.2辛硫磷 13 10.3 4 0.05（鳞茎类蔬菜）吡虫啉 32 25.4 0 1二甲戊灵 55 43.6 12 0.2甲拌磷 9 7.1 9 0.01（鳞茎类蔬菜）
8种农药检出率最高的为二甲戊灵，检出率43.6%，55批次有检出，其中有12批次不合格，腐霉利和吡虫啉的检出率较高，但吡虫啉没有不合格批次，4批次样品中辛硫磷超标，占有辛硫磷检出批次的31%，此外，甲拌磷和毒死蜱等禁限用农药也有不同程度的检出，但氧乐果均未检出。
2.3 生产规模分析
采集的126批次韭菜样品中，73批次来自于中小规模的韭菜生产单位，53批次来自大规模韭菜生产基地。不同生产规模的韭菜样品不合格结果分析见表4。
表4 不同生产规模的韭菜样品结果分析
Table 4 Results analysis of leek samples with different production scales
取样规模 总批次 无检出批次合格批次 不合格项次73 18 43 腐霉利（11），毒死蜱（5），克百威（7），甲拌磷（9），辛硫磷（1），二甲戊灵（4）大规模 53 17 42 辛硫磷（3），二甲戊灵（8）中小规模
从采样结果看，大规模生产基地的产品合格率为79%，远大于中小规模的59%。中小规模生产产品中使用禁限用农药的问题比较突出。
2.4 腐霉利的消解
消解趋势如图1、图2。
图1 腐霉利在露地韭菜的消解曲线图
Fig.1 Dissipation curve of procymidone in open field leek
图2 腐霉利在设施韭菜中的消解曲线
Fig.2 Dissipation curve of procymidone in greenhouses leek
50%腐霉利可湿性粉剂，以最大推荐剂量（450g ai/ha）于韭菜约10 cm高时施用1次，其沉积量均较高，残留量随着时间的推移呈现明显下降趋势，露地韭菜在施药5 d后呈现明显的下降趋势，而后逐渐趋于平缓，设施韭菜在施药15 d后呈现明显的下降趋势，随后趋于平缓，其消解动态符合一级动力学反应模型。露地韭菜中的消解曲线为y=14.784 8e-0.1312x，相关系数r=0.954 8，消解半衰期为5.3 d，经过17.6 d，可降解90%；设施韭菜的消解曲线为y=11.242 5e-0.0719x，相关系数r=0.969 2，消解半衰期为9.6 d，经过32 d，可降解90%。
3 结论与讨论
根据采集样品残留结果可以看出，氧乐果在所有样品中均未检出，但甲拌磷、克百威、毒死蜱等农药有检出，检出率约为6%，几乎全部集中于中小生产规模的韭菜样品。这可能是农药的混用造成的，当然也不排除土壤中农药长期残留的影响和农药隐性成分添加造成的，同时也说明加强对农药使用监管和合理化使用，是提升韭菜等农产品安全生产的关键因素。
二甲戊灵是唯一在韭菜上登记使用的田间除草剂。以往人们习惯把农药残留危害的重点集中在杀虫、杀螨、杀菌等农药上，然而本次收集数据显示，二甲戊灵在韭菜中的检出率为43.6%。其可能的原因是人们对除草剂的危害认识不够或除草剂使用不当，导致药物逐渐在田间积累，形成了一定的风险危害，应当引起我们的高度重视。
腐霉利是具有保护和治疗双重作用的低毒内吸性杀菌剂，常被用于防治韭菜灰霉病等病害。通过本次采集的数据可知韭菜中腐霉利有检出。因而，根据试验产品登记信息，开展了腐霉利在韭菜上的消解试验。以腐霉利最大推荐剂量应用于韭菜，其使用30 d后的残留量仍然在0.2 mg/kg左右，接近于我国韭菜中腐霉利最大残留限量要求，可能是由于其原始沉积量较大造成的。然而，韭菜收获期短，30 d的间隔期不适合韭菜产品的实际生产需求。参考试验数据，建议经过进一步试验，评估腐霉利膳食风险，重新制定韭菜中腐霉利的限量要求。
[1]马云天,袁皓杰,蒋家璐,等.比色法测定韭菜子不同极性部位中总甾体含量[J].信息记录材料,2017,18(3):66-68.MA Yuntian,YUAN Haojie,JIANG Jialu,et al.Determination of total steroids in different polar parts of Chinese chive seed by colorimetric method[J].Information Recording Materials,2017,18(3):66-68.
[2]李欢,张梦飞,苗明三.韭菜籽的现代研究与思考[J].中医学报,2017,32(3):430-432.LI Huan,ZHANG Mengfei,MIAO Mingsan.Modern research and thinking of leek rapeseed[J].Acta Chinese Medicine,2017,32(3):430-432.
[3]李莎莉,吴琦,徐帅,等.韭菜生物活性及其药食资源开发进展[J].食品研究与开发,2018,39(9):197-202.LI Shali,WU Qi,XU Shuai,et al.Advances in the bio-activities and the drug and food resources development of chives[J].Food Research and Development,2018,39(9):197-202.
[4]李莎莉,徐帅,聂进卓,等.韭菜不同极性部位抗氧化活性研究[J].食品科技,2019,44(1):286-290.LI Shali,XU Shuai,NIE Jinzhuo,et al.Antioxidant activity of different polar parts of Chinese chive[J].Food Science and Technology,2019,44(1):286-290.
[5]SOBOLEWSKA D,MICHALSKA K,PODOLAK I,et al.Steroidal saponins from the genus Allium[J].Phytochemistry Reviews,2016,15(1):1-35.
[6]DOBHAL Y,PARCHA V,DHASMANA D C.Cardioprotective potential of Allium humile leaves extract[J].Oriental Pharmacy and Experimental Medicine,2014,14(2):157-162.
[7]张旭晟,高阳光,彭少杰.韭菜中农药腐霉利残留的膳食暴露风险评估[J].食品安全质量检测学报,2019,10(10):3114-3119.ZHANG Xusheng,GAO Yangguang,PENG Shaojie.Dietary exposure assessment of procymidone residue in Chinese leek(Allium tuberosum Rottl.ex Spr.)[J].Journal of Food Safety&Quality,2019,10(10):3114-3119.
[8]徐淑兵,杨帅,吴亚玉,等.嘧霉胺对韭菜灰霉病菌的室内毒力及田间防效[J].农药,2019,58(10):777-780.XU Shubing,YANG Shuai,WU Yayu,et al.The toxicity and field control effects of pyrimethanil against Chinese chive gray mold[J].Agrochemicals,2019,58(10):777-780.
[9]胡静荣,史彩华,徐宝云,等.臭氧水对韭蛆的防治效果及对韭菜生长的影响[J].昆虫学报,2018,61(12):1404-1413.HU Jingrong,SHI Caihua,XU Baoyun,et al.Control efficacy of ozone water against Bradysia odoriphaga(Diptera:Sciaridae)larvae and its influence on the growth of Chinese chives[J].Acta Entomologica Sinica,2018,61(12):1404-1413.
[10]王小梦,巴秀成,高庆华,等.印楝素等生物杀虫剂对韭菜蓟马的防治效果[J].浙江农业科学,2020,61(9):1848-1849,1853.WANG Xiaomeng,BA Xiucheng,GAO Qinghua,et al.Control effects of biological insecticides including azadirachtin against Thrips on leek[J].Journal of Zhejiang Agricultural Sciences,2020,61(9):1848-1849,1853.
[11]李亚萌,毕扬,卢彩鸽,等.防治韭菜灰霉病的药剂筛选试验[J].中国植保导刊,2020,40(8):63-65,68.LI Yameng,BI Yang,LU Caige,et al.Selection of fungicides against Botrytis squamosal on Chinese chive(Allium tuberosum)[J].China Plant Protection,2020,40(8):63-65,68.
[12]王哲,钟涛,刘培斌,等.韭菜迟眼蕈蚊发生规律及防治方法研究进展[J].环境昆虫学报,2017,39(6):1397-1406.WANG Zhe,ZHONG Tao,LIU Peibin,et al.Research progress on incidence and control of Bradysia odoriphaga[J].Journal of Environmental Entomology,2017,39(6):1397-1406.
[13]钱秀娟,张文丽,刘长仲.昆虫病原线虫与吡虫啉混用对异迟眼蕈蚊幼虫的毒力测定[J].甘肃农业大学学报,2019,54(2):102-108.QIAN Xiujuan,ZHANG Wenli,LIU Changzhong.Virulence of entomopathogenic Nematodes and imidacloprid to Bradysia odoriphaga[J].Journal of Gansu Agricultural University,2019,54(2):102-108.
[14]吕冰峰,刘敏,邢书霞.2018年蔬菜国家食品安全监督抽检结果分析[J].食品安全质量检测学报,2019,10(17):5715-5721.LV Bingfeng,LIU Min,XING Shuxia.Analysis of the national food safety supervision and sampling inspection result on vegetables in 2018[J].Journal of Food Safety and Quality,2019,10(17):5715-5721.
[15]郭振营,李梦姣,王振军.几种韭菜田除草剂大田防除效果及其安全性研究[J].安徽农业科学,2014,42(25):8605－8607.GUO Zhenying,LI Mengjiao,WANG Zhenjun.Efficacy and crop safety of several leek herbicides[J].Journal of Anhui Agriculture Science,2014,42(25):8605－8607.
[16]洪泽淳,熊含鸿,刘莹莹,等.气相色谱法同时测定韭菜中16种有机磷农药残留[J].食品研究与开发,2018,39(10):129-133.HONG Zechun,XIONG Hanhong,LIU Yingying,et al.Simultaneously detection of 16 kinds of organophosphorus pesticides residues in leek by gas chromatography[J].Food Research and Development,2018,39(10):129-133.
[17]张权,沙比拉·吐拉江,周贻兵,等.不同种类固相萃取柱测定韭菜中58种农药残留量的净化效果比较[J].食品工业科技,2019,40(20):243-250,261.ZHANG Quan,SHABILA Tulajiang,ZHOU Yibing,et al.Comparison of purfication effect of different types of SPE column on the dertermination of 58 pesticide residues in chives[J].Science and Technology of Food Industry,2019,40(20):243-250,261.
[18]马楠,张玉娟,张志强.QuEChERS/GC-MS法检测韭菜中19种农药残留[J].食品工业,2020,41(1):323-326.MA Nan,ZHANG Yujuan,ZHANG Zhiqiang.Determination of 19 pesticide residues in Chinese chives by QuEChERS method coupled with gas chromatography-mass spectrometry[J].The Food Industry,2020,41(1):323-326.
[19]王洁莲,董燕飞.高效液相色谱法同时检测蔬菜中7种农药残留方法的分析[J].中国农学通报,2015,31(12):267-272.WANG Jielian,DONG Yanfei.Simultaneous determination for residues of seven pesticide residues in vegetables by HPLC with electron capture detector[J].Chinese Agricultural Science Bulletin,2015,31(12):267-272.
[20]罗梅梅,朱晓丹,贺敏,等.超高效液相色谱-串联质谱法检测韭菜中4种杀虫剂残留[J].农药,2014,53(11):821-824.LUO Meimei,ZHU Xiaodan,HE Min,et al.Determination of 4 insecticides residues in leek by ultra high performance liquid chromatography-mass spectrometry[J].Agrochemicals,2014,53(11):821-824.
[21]闫震,聂继云,徐国锋,等.超高效液相色谱-串联质谱法对比4种净化方式对不同色素含量基质中19种农药残留检测的影响[J].分析测试学报,2014,33(9):1000-1009.YAN Zhen,NIE Jiyun,XU Guofeng,et al.Effects of four kinds of purification methods for determination of 19 pesticide residues in substrates of different pigments analyzed by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J].Journal of Instrumental Analysis,2014,33(9):1000-1009.
[22]LI X,CHEN X X,HU J Y.Dissipation behavior,residue distribution and dietary risk assessment of chlorfenapyr and clothianidin in leek using RRLC-QqQ-MS/MS technique[J].Chinese Chemical Letters,2019,30(1):107-110.
[23]贺敏,宋丹,董丰收,等.UPLC-MS/MS快速检测韭菜和土壤中氟虫腈及其代谢物残留[J].环境化学,2016,35(5):925-932.HE Min,SONG Dan,DONG Fengshou,et al.Determination of fipronil and its metabolites in leek and soil by ultrahigh performance liquid chromatography-mass spectrometry[J].Environmental Chemistry,2016,35(5):925-932.
[24]张璇,姜敏,何锦惠,等.高效液相色谱-质谱联用仪测定韭菜中多菌灵、吡虫啉等7种农药残留量[J].农药科学与管理,2016,37(4):41-47.ZHANG Xuan,JIANG Min,HE Jinhui,et al.Determination the residue of seven pesticides in leek by HPLC-MS[J].Pesticide Science and Administration,2016,37(4):41-47.
[25]国家卫生健康委员会,农业农村部,国家市场监督管理总局.食品安全国家标准食品中农药最大残留限量：GB 2763—2019[S].北京:中国标准出版社,2020.National Health Commission,Ministry of Agriculture and Rural Affairs,State Administration for Market Regulation.National food safety standard—Maximum residue limits for pesticides in food:GB 2763—2019[S].Beijing:Standards Press of China,2020.