枸杞的传统药用部位是果实，具有悠久的开发利 用历史。除枸杞果实以外，枸杞叶俗称天精草，是一味重要的中药材，具有补虚益精、清热止渴、养肝明目之功效。近年来，大量研究表明，枸杞叶富含多糖[1]、多酚和黄酮类[2]、亚精胺和萜类[3]等多种功效成分[4-5]，并具有抗氧化[3]、预防肥胖[6]、抗炎[7]、提高免疫力[8]、预防糖尿病[9]等多种功效作用，多被用于加工制成茶叶消费[6]，也可作为新鲜蔬菜食用，市场应用前景广阔。
Zhao等研究表明不同产地的枸杞叶酚类物质组成差异较大[10]。但不同品种、栽培条件和加工厂家/方式下枸杞叶中的成分差异性探讨较少。另外，氨基酸也是枸杞叶茶中的重要的化学成分指标。本文通过初步分析不同生产厂家、品种的枸杞叶及枸杞叶/芽茶样本的总黄酮和总多酚的含量、氨基酸含量及组成情况，旨在为枸杞叶的开发利用提供基础数据。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
芦丁（纯度≥98%）：上海源叶生物科技有限公司；甲醇、无水乙醇：徐州天鸿化工有限公司；亚硝酸钠：上海广诺化学科技有限公司；氢氧化钠、硝酸铝：天津市大茂化学试剂厂；三氯化铝：成都市科龙化工试剂厂。其它试剂均为分析纯。
不同的枸杞叶及其叶/芽茶样本信息如表1所示。枸杞叶茶指将枸杞叶/芽按照绿茶加工工艺制成的样品，枸杞叶/芽指采摘后经冷冻干燥制成的样品。
表1 枸杞叶及叶茶样品信息表
Table 1 The information of leaves tea and leaves samples from
编号 样品名称 来源1 枸杞芽茶 河北品种宁夏育新公司栽植并采用绿茶工艺加工2 枸杞叶茶 宁夏育新公司采用绿茶工艺加工3 枸杞叶茶 河北品种宁夏育新公司栽植并采用绿茶工艺加工4 枸杞叶茶 河北品种河北栽植并采用绿茶工艺5 枸杞嫩枝扦插苗（宁杞1号）采集于宁夏园林场国家枸杞工程技术研究中心基地，冷冻干燥制备6 黑果枸杞芽茶 黑果枸杞芽茶（国家枸杞工程技术研究中心制作）7 枸杞嫩枝扦插苗（宁杞7号）采集于宁夏园林场国家枸杞工程技术研究中心基地，冷冻干燥制备8 成龄黑果枸杞树叶采集于宁夏园林场国家枸杞工程技术研究中心基地，冷冻干燥制备9 枸杞芽茶 宁夏农林科学院园艺研究所
1.2 仪器与设备
Hitachi L-8900氨基酸分析仪、BS 224 S分析天平：德国赛多利斯公司；TU-1810紫外可见分光光度计：北京普析通用仪器有限责任公司；RE-52AA旋转蒸发器：上海亚荣生化仪器厂；JP-1020全数字超声波发生器：武汉嘉鹏电子有限公司；WHY-2往复式水浴恒温振荡器：常州市万丰仪器制造有限公司。
1.3 方法
1.3.1 茶叶及枸杞叶/芽样品提取
取各样本200 g左右粉碎，准确称取样品1.00 g（3个平行），分别置于250 mL平底烧瓶中，加入75%乙醇溶液50 mL，于70℃水浴中回流提取2 h，冷却后过滤，弃滤渣，留滤液，再用75%乙醇定容至50 mL容量瓶中，4℃保存待用。
1.3.2 叶茶及枸杞叶/芽中黄酮测定
将1.3.1中提取的样品，吸取0.5 mL，以芦丁作为标准品计量，参考闫亚美等的方法进行总黄酮含量的测定[11]。
1.3.3 叶茶及枸杞叶/芽中多酚测定
将1.3.1中提取的样品，吸取1 mL以没食子酸作为标准品计量，参考闫亚美等的方法进行总多酚含量的测定[11]。
1.3.4 氨基酸的测定
参考周志阳等[12]的氨基酸测定方法进行测定。
1.3.5 数据处理及分析
数据统计分析使用SPSS 21.0软件进行方差分析（analysis of variance，ANOVA），采用 Ducan法对数据进行单因素方差分析，采用因子分析进行主成分分析（principal component analysis，PCA），所有试验均重复 3次。
2 结果及分析
2.1 不同来源的枸杞叶及其叶/芽茶黄酮含量分析
枸杞叶茶及枸杞叶中黄酮含量分析见图1。
图1 枸杞叶茶及枸杞叶中黄酮含量
Fig.1 The contents of flavonoids in leaves tea and leaves from wolfberry
不同字母表示不同样本间差异显著（P＜0.05）。
由图1可知，9个样品中，各类叶茶及枸杞叶中黄酮含量大小依次为 6、5、4、9、3、7、8、2、1 号。其中，黑果枸杞芽茶的黄酮含量显著高于其它枸杞品种来源的芽/叶。
3个枸杞芽茶样中，黄酮含量分别为1.18%、8.23%和6.49%，各样品之间黄酮含量存在显著差异。其中，黑果枸杞芽茶显著高于其它两个公司产的枸杞芽茶。3个不同叶茶含量分别为2.13%、4.91%和6.88%，三者存在显著差异，但含量介于2%～7%之间，幅度小于芽茶中黄酮含量的幅度（1%～8%），但同一品种的枸杞叶在不同产区种植并加工后的黄酮含量存在差异。3个枸杞叶，包括嫩枝扦插苗的黄酮含量分别为7.59%、4.79%和3.15%。其中，黑果枸杞叶中的黄酮显著低于宁杞1号和7号的嫩枝扦插苗和黑果枸杞芽茶。
2.2 不同来源枸杞叶及其叶/芽茶多酚含量分析
枸杞叶茶及枸杞叶中多酚含量分析见图2。
图2 枸杞叶茶及枸杞叶中多酚含量
Fig.2 The contents of polyphenols in leaves tea and leaves from wolfberry
不同字母表示不同样本间差异显著（P＜0.05）。
由图2可知，9个样品中，各类叶茶及枸杞叶中多酚含量大小依次为 6、5、2、4、1、7、3、8、9 号。黑果枸杞芽茶的多酚含量显著高于其它枸杞品种来源的芽/叶或枸杞叶。多酚是茶叶中的主要功效成分，具有多种保健作用[13-14]，由此可见，黑果枸杞芽茶具有较高的利用价值。
3个枸杞芽茶样，多酚含量分别为10.37%、14.73%和3.57%，各样品之间多酚含量存在显著差异。其中，黑果枸杞芽茶显著高于其它3个公司产的枸杞芽茶（1号～4号、9号样本）。3个不同叶茶含量分别为12.61%、8.47%和12.52%，三者存在显著差异，但含量介于8.47%～12.61%之间，幅度小于芽茶中多酚含量的幅度（3%～14%）。3个枸杞叶，包括嫩枝扦插苗的多酚含量分别为13.5%、9.66%和8.16%。其中，黑果枸杞叶中的黄酮显著低于宁杞1号和7号的嫩枝扦插苗和黑果枸杞芽茶。
9个样品中，各样品黄酮和多酚除个别样品外，黄酮含量和多酚含量样本间均存在显著差异。该结果揭示，生产工艺、品种、栽培条件等可能均影响枸杞叶茶的黄酮和多酚的含量；且除黑果枸杞芽茶外，宁杞1号和宁杞7号的嫩枝扦插苗也可作为良好的富含酚类物质的枸杞叶茶加工原料。除9号样品多酚含量小于黄酮含量外，其它样品的多酚含量均高于黄酮含量。该结果表明，多数枸杞叶茶除黄酮外，还富含有其它类物质的酚类化合物，其组成和结构及其样品之间的差异性有待于进一步研究探讨。
2.3 不同来源枸杞叶及其叶/芽茶氨基酸含量分析
2.3.1 不同来源枸杞叶及其叶/芽茶氨基酸含量的分析
不同来源枸杞叶及其叶/芽茶的氨基酸含量如表2所示。
表2 不同枸杞叶及叶茶中氨基酸含量（n=3）
Table 2 The contents of amino acids in leaves and leaves tea from wolfberry（n=3） %
氨基酸样本号1 2 3 4 5 6 7 8 9 Asp天冬氨酸 2.37 2.04 1.60 2.57 3.43 2.76 2.17 2.03 2.36 Thr苏氨酸 1.41 2.35 1.74 1.17 1.86 1.58 1.01 1.12 1.45 Ser丝氨酸 1.13 1.83 1.91 0.87 1.33 1.15 0.78 0.92 1.14 Glu谷氨酸 2.51 4.68 3.92 2.55 2.94 2.85 1.94 2.07 2.59 Pro脯氨酸 1.29 2.74 0.42 1.30 1.57 1.53 0.89 1.14 1.39 Gly甘氨酸 1.16 1.60 1.09 1.00 1.28 1.29 0.99 1.13 1.38 Ala丙氨酸 1.32 2.26 1.29 0.99 1.35 1.40 1.01 1.20 1.56 Cys半胱氨酸 0.120 0.282 0.069 0.100 0.142 0.112 0.057 0.093 0.128 Val缬氨酸 1.30 1.80 1.59 1.17 1.62 1.53 1.08 1.25 1.55 Met蛋氨酸 0.10 0.23 0.11 0.07 0.12 0.09 0.07 0.14 0.13 lle异亮氨酸 1.05 1.49 1.22 0.89 1.27 1.21 0.86 1.02 1.26 Leu亮氨酸 2.17 3.26 2.73 1.84 2.51 2.53 1.82 2.15 2.75 Tyr酪氨酸 1.02 1.66 1.16 0.92 1.21 1.20 0.82 1.09 1.39 Phe苯丙氨酸 1.39 2.08 1.65 1.40 1.87 1.57 1.10 1.33 1.69 Lys赖氨酸 1.86 2.25 2.06 1.62 2.34 2.25 1.66 1.86 2.28 His组氨酸 0.59 0.90 0.63 0.59 0.77 0.71 0.50 0.56 0.71 Arg精氨酸 1.30 1.92 2.02 1.01 1.46 1.56 1.07 1.30 1.68总量 22.07 33.38 25.21 20.05 27.08 25.33 17.82 20.40 25.41必需氨基酸 9.28 13.46 11.1 8.16 11.59 10.76 7.6 8.87 11.11非必需氨基酸 12.81 19.912 14.109 11.9 15.482 14.562 10.227 11.533 14.328必需氨基酸/总氨基酸 42.01 40.33 44.03 40.68 42.81 42.49 42.63 43.47 43.67非必需氨基酸/总氨基酸 57.99 59.67 55.97 59.32 57.19 57.51 57.37 56.53 56.33必需氨基酸/非必需氨基酸 72.44 67.60 78.67 68.57 74.86 73.89 74.31 76.91 77.54
不同枸杞叶及其叶/芽茶中均检测到17种氨基酸，其中，包括7种必需氨基酸，苏氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸和赖氨酸，以及10种非必需氨基酸，天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、组氨酸、精氨酸。9种样品中均没有检测到色氨酸。其中，含量最高的必需氨基酸为亮氨酸，含量最高的非必需氨基酸为天冬氨酸和谷氨酸，这与周志阳等[12]的研究结果较为一致。除茶氨酸外，谷氨酸和天冬氨酸是重要的鲜味氨基酸[15-16]，枸杞芽/叶富含谷氨酸和天冬氨酸赋予了其作为茶叶的良好原料的滋味源。
2.3.2 不同来源枸杞叶及其叶/芽茶氨基酸含量的主成分分析
对不同枸杞叶及其叶/芽茶的17种氨基酸进行主成分分析，可以观察到组间样本的总体分布趋势，得分图和载荷图如图3和图4所示。
图3 不同来源枸杞叶及叶茶氨基酸含量的载荷图
Fig.3 Loading diagram of amino acids contents in different wolfberry leaves or leaves tea
图4 不同来源枸杞叶及叶茶氨基酸含量的得分图
Fig.4 Score chart of amino acids contents in different wolfberry leaves or leaves tea
第一主成分对总变异的贡献率为76.5%，第二主成分对总变异的贡献率为11.5%，这两个主成分包含了样本88.0%的信息，能够充分覆盖样本的信息。从图3可以看出，除天冬氨酸以外，其他16种氨基酸均分布在载荷图的左侧，说明这16种氨基酸的相关性较大。图 4 中，2、3、5、6、9 号样品分布在得分图的左侧，1、4、7、8 号样品分布在得分图的右侧。表明，2、3、5、6、9号样品的的氨基酸含量高于1、4、7、8号样品。表明，样本中的氨基酸含量差异较大。比较而言，2和3号来自同一家种植生产厂家，表明枸杞品种因素对氨基酸的含量具有影响；较黑果枸杞芽而言，成龄黑果枸杞树叶氨基酸含量较低，不利于茶叶加工；此外，宁杞1号氨基酸含量较优于宁杞7号，可见，品种差异对枸杞叶茶加工中的氨基酸指标贡献较大，进而影响其茶的滋味品质。
3 结论
黑果枸杞芽茶多酚和黄酮含量显著高于其它各样本，并富含较高的氨基酸。除个别样品外，黄酮和多酚黄酮含量和多酚含量样本间均存在显著差异，且多酚含量均高于黄酮含量。不同品种和栽培条件下的枸杞叶及叶茶的黄酮、多酚、氨基酸含量与组成差异较大。此外，除黑果枸杞芽茶外，宁杞1号和宁杞7号的嫩枝扦插苗也可作为良好的富含酚类物质的资源加以开发利用。
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